Imunocitoquímica na Neoplasia intra-epitelial e Câncer Invasivo
Para classificar a neoplasia intra-epitelial cervical, Os citopatologistas se baseiam em critérios citomorfológicos como a hipercromasia nuclear, atipia nuclear e proporções nucleocitoplasmáticas. Esta forma de classificação não pode prever o comportamento biológico das lesões NIC. Uma tremenda quantidade de marcadores biológicos ou biomarcadores de ponto final substituto que são amplamente aplicáveis para tecidos cervicais histológicos são desenvolvidos. Estes marcadores são geralmente introduzidos como “muito promissores” na previsão correta do comportamento regressivo ou progressivo das lesões cervicais. Na prática diária, a aplicabilidade destes marcadores é bastante decepcionante. Como as primeiras observações sugerem que o NIC envolve uma disfunção progressiva da atividade proliferativa das células epiteliais cervicais, a maioria dos marcadores biológicos desenvolvidos são proteínas que desempenham um papel crucial nas vias regulatórias do ciclo celular. Referimo-nos ao Capítulo 1 para uma visão extensiva destes marcadores biológicos, especialmente equipados para histologia cervical. Na citologia cervical a escolha dos marcadores biológicos é historicamente muito mais limitada, uma vez que o rastreio é feito com os esfregaços manchados de Papanicolaou e normalmente não há material de repouso para pesquisa adicional. Além disso, se a imunocitoquímica em espécimes citológicos úmidos diretos, como a citologia em meio líquido, quer ser bem sucedida, é necessária uma ligeira fixação curta em álcoois ou acetona. Somente em laboratórios altamente qualificados e bem controlados é que esta fixação leve pode ser realizada adequadamente, de modo que resultados de coloração imunocitoquímica reprodutível possam ser obtidos. Este problema não ocorre na histologia devido à fixação robusta de rotina dos tecidos em formalina.
O desenvolvimento de anticorpos monoclonais específicos da cadeia (mAbs) para queratinas individuais permite a distinção imunocitoquímica entre células de reserva, metaplasia escamosa imatura e madura e epitélio escamoso ectocervical colunar normal e endocervical, bem como entre diferentes tipos de anormalidades epiteliais (NIC graus 1, 2, e 3).123,228-230
Usando vários anticorpos monoclonais dirigidos contra diferentes epitopos do mesmo polipeptídeo de queratina (por exemplo, diferentes mAbs contra queratina 18), é possível detectar alterações estruturais resultantes da atividade biológica ou transformação neoplásica. O grau de diferenciação em um câncer de células escamosas pode ser determinado pelo uso de anticorpos queratinas 10 ou 13. A queratina 10 é um marcador de queratinização. Ela pode ser expressa em células das camadas mais superficiais do epitélio escamoso, mesmo quando nenhum sinal de queratinização é detectado microscopicamente.
Os mAbs de reação transversal dão reações positivas em praticamente todos os tecidos epiteliais e cânceres epiteliais primários e metastáticos, incluindo carcinomas de células escamosas de diferentes graus de diferenciação e carcinomas anaplásicos de pequenas células. Os anticorpos para queratina 18 podem, entre outros, reconhecer adenocarcinomas, mas normalmente não reagem com carcinomas espinocelulares.231 Os adenocarcinomas são quase sempre negativos para queratinas 5, 10, 13, e 16. Os carcinomas espinocelulares quase sempre são positivos para as queratinas 5, 10, e 13. A expressão de queratina 16 é restrita à queratinização de carcinomas espinocelulares. A queratina 7 mAbs em geral não deu nenhuma reação de coloração com (queratinização) epitélio escamoso. Este anticorpo reage com células colunares no colo uterino.232
Moll e colaboradores mostraram a presença de citoceratinas 5, 7, 8, 17, 18 e 19 em metaplasia escamosa imatura e um padrão alterado de expressão de queratina em epitélio escamoso maduro e displasia leve233 (Fig. 8.125). Encontraram um padrão semelhante no carcinoma invasivo como no epitélio escamoso maduro.
Smedts e colegas, no epitélio cervical anormal, encontraram citoceratinas 10, 11, 13 e 16 com distribuição irregular no grau NIC 3.234.235. Áreas de positividade alternadas com áreas negativas. Não conseguiram demonstrar uma mudança consistente e progressiva no conteúdo de citoceratina do epitélio normal para os graus CIN 1 e 2. Suas observações sugerem que ocorreu uma mudança abrupta no momento do desenvolvimento da lesão morfologicamente descrita como NIC grau 3. As lesões NIC grau 2 nas invaginações do canal endocervical tinham um padrão idêntico ao das lesões na superfície do canal. O padrão de coloração no NIC grau 3 foi comparável ao encontrado no carcinoma escamoso invasivo. Puts e associados usaram anticorpos anti-citoqueratina para queratinas e não encontraram diferenças qualitativas nas reações de coloração entre lesões epiteliais de vários graus de gravidade.236 Encontraram um número variável de células de Langerhans em 32 lesões displásicas, mas nenhum padrão específico na distribuição entre lesões de gravidade diferente.6 Eles especularam que as diferenças no número de células de Langerhans podem estar correlacionadas com diferenças nos processos displásicos, bem como com diferenças na resposta do hospedeiro e, portanto, podem ser potencialmente um indicador de tendência à regressão ou progressão.
Smedts e colegas de trabalho investigaram a expressão de queratinas em epitélios cervicais normais, epitélio metaplásico e NIC graus 1, 2 e 3 com um painel de mAbs específicos de cadeia.237.238 Isto permitiu a detecção de queratinas individuais 4, 5, 7, 8, 10, 13, 14, 18, e 19 ao nível de célula única. Os resultados mostraram que durante a transformação das células de reserva em metaplasia escamosa imatura, este epitélio adquiriu queratinas típicas do epitélio escamoso ectocervical, enquanto que as queratinas típicas das células de reserva e as células colunares foram perdidas. Esta mudança continuou durante a diferenciação posterior em metaplasia escamosa madura. A transformação premaligna resultou na perda parcial das queratinas típicas do epitélio escamoso e aquisição de queratinas atípicas do epitélio simples.
No curso do aumento da atipia epitelial através dos graus 1 a 3 da neoplasia intra-epitelial, as queratinas características do epitélio simples aparecem em lesões displásicas (Fig. 8.126). Em NIC grau 1 aproximadamente metade e em NIC grau 2 (displasia moderada) um terço dos casos mostra alguma positividade dispersa para as queratinas 8 e 18, enquanto a queratina 19, que em epitélio escamoso maduro mancha as camadas basais, agora mostra perda de polaridade e mancha uma parte crescente de toda a espessura do epitélio displásico, muitas vezes em um padrão irregular.
Comparado com o epitélio escamoso maduro, a expressão das queratinas 4, 5, 13 e 14 diminuiu e o padrão de coloração tornou-se variável (Fig. 8.127 e 8.128). Isso indicou que o epitélio displásico relacionado à progressão da gravidade da anormalidade perdeu progressivamente seu fenótipo de queratina escamosa e adquiriu características de queratina do epitélio simples.
Estas alterações foram ainda mais evidentes nos casos de NIC grau 3; em todos os casos, a expressão das queratinas 8 e 18 foi abundante e a expressão das queratinas 13 e 14 diminuiu, em algumas áreas tornando-se completamente ausente. Isto enfatizou o aumento da expressão de um padrão de queratina característico do epitélio simples com aumento da alteração displásica.
Keratinas 8, 18 e 19 foram encontradas em carcinomas espinocelulares cervicais, bem como em adenocarcinoma. A expressão destas queratinas em células de reserva pode indicar que estas células são as células progenitoras comuns com um duplo potencial de diferenciação, por um lado através de uma fase de metaplasia em anormalidades epiteliais escamosas e, por outro, através da diferenciação em uma anormalidade tipo célula colunar. A dupla expressão das queratinas tipo célula escamosa e tipo célula colunar em metaplasias escamosas imaturas parece suportar esta hipótese.228,229