De acordo com diretrizes internacionais recentes, incluindo o Terceiro Definitório Universal de Infarto do Miocárdio de 2012 pela Força Tarefa Conjunta ESC/ACCF/AHA/WHF, um aumento nos níveis de troponina cardíaca (cTn) acima do limite de referência superior do percentil 99 (99º URL) deve ser considerado clinicamente relevante, sendo este corte medido com uma imprecisão ≤10 CV%. Em teoria, os valores da 99ª URL dependem fortemente não apenas de variáveis demográficas e fisiológicas (ou seja, critérios para considerar a população de referência “saudável”), mas também do desempenho analítico dos métodos cTn e dos algoritmos matemáticos utilizados para o cálculo. O objetivo do presente artigo foi, portanto, rever os fatores metodológicos e fisiopatológicos que afetam a avaliação e cálculo da 99ª URL para o ensaio cTn. A análise crítica feita mostrou que nenhum procedimento uniforme é seguido, e nem os especialistas ou órgãos reguladores forneceram diretrizes uniformes para pesquisadores ou fabricantes de ensaios cTn como um auxílio na “sua busca para definir a normalidade”. Em particular, pouca atenção tem sido dada à forma como uma população de referência saudável deve ser selecionada, ou aos critérios para o cálculo do valor de 99º URL para os ensaios cTn, destacando assim a necessidade de recomendações internacionais não apenas para critérios de variáveis demográficas e fisiológicas para definir uma população de referência saudável, mas também para o cálculo de algoritmos matemáticos para estabelecer/calcular valores de decisão clínica. Um grupo de consenso de especialistas, composto por cientistas laboratoriais e clínicos, estatísticos biomédicos, representantes industriais e reguladores, deve ser responsável pela elaboração dessas diretrizes.