Abstract
Em 1992 relatamos um novo método de seqüenciamento de proteínas do Términus-C (Términus-C) (Boyd et al., 1992). Nos últimos 2 anos, continuamos nossas investigações, incluindo o mecanismo de ativação inicial do grupo carboxilo C-terminal e as modificações deliberadas das cadeias laterais reativas dos aminoácidos com os reagentes seqüenciadores. Através da selecção dos reagentes e condições de reacção utilizadas para o nosso protocolo de sequenciação, o ácido aspártico, ácido glutâmico, serina e treonina são derivatizados. A amidação do ácido aspártico e glutâmico, e a acetilação da serina e da treonina, levaram a um melhor rendimento no sequenciamento destes resíduos. O ácido aspártico e glutâmico são agora categorizados, como visto na Tabela 1, como resíduos de aminoácidos que são prontamente sequenciados. Nosso critério para determinar se um resíduo é chamado de forma confiável é a capacidade de seqüenciar e detectar esse resíduo quando ele está presente em uma nanomole de uma amostra de proteína. Em média, é possível seqüenciar 5 ciclos em uma nanomole de proteína aplicada à membrana de difluoreto de polivinilideno (PVDF) se a seqüência de aminoácidos contiver os resíduos listados na coluna “chamada de forma confiável” da Tabela 1. Nosso foco para a conferência MPSA 1994 é ilustrar a utilidade atual deste método de seqüenciamento terminal C no seqüenciamento de proteínas imobilizadas em PVDF.