Mass Cytometry
Mass cytometry, ou CyTOF (Fluidigm), é uma variação da citometria de fluxo na qual os anticorpos são rotulados com tags de íons metálicos pesados em vez de fluorocromos. A leitura é feita por espectrometria de massa de tempo de vôo. Isto permite a combinação de muitas mais especificidades de anticorpos em uma única amostra, sem derramamento significativo entre canais. Temos painéis padronizados para imunofenotipagem, fenotipagem + coloração de citocinas intracelulares (ICS) e fenotipagem + fosfo-CyTOF, cada um com 30 a 38 anticorpos. Contacte [email protected] para mais detalhes.
Imunofenotipagem: Nosso painel de imunofenotipagem de 33 anticorpos CyTOF é projetado para uso com PBMC criopreservado, embora possa ser adaptado para outros tipos de amostra. Um número limitado de anticorpos adicionais pode ser adicionado aos canais abertos, sujeito à disponibilidade.
Citoquinas intracelulares: O nosso painel de 38 anticorpos CyTOF ICS destina-se principalmente à dissecção das respostas das células T. Substituições limitadas são possíveis (com as comuns como listadas).
Phospho-CyTOF: Nosso painel de 30-anticorpos CyTOF pode ser usado com os estímulos indicados para ler uma ampla gama de vias de sinalização em muitos subconjuntos de células diferentes. Adições ou substituições neste painel são mais difíceis, devido à exigência de anticorpos marcadores de superfície para funcionar bem em epitopos fixos.
Veja aqui a lista de anticorpos padrão nestes três painéis CyTOF. (revisado em junho de 2018)
Para uma entrevista em vídeo com o Dr. Mike Leipold sobre questões experimentais do CyTOF, veja https://www.youtube.com/watch?v=UYYq9jh7FgQ.
Instruções de uso
1. Planejando o seu ensaio: Os ensaios CyTOF são executados em lotes de até 12 amostras. Se tiver mais amostras, tente randomizar os lotes para que, por exemplo, os casos e controles não sejam segregados em lotes separados.
2. Coleta das amostras: Por favor, use um PROTOCOLO DE CRYOPRESERVAÇÃO optimizado para PBMC viável. Recomendamos congelar 10^7 células por criovial, e fornecer um criovial para cada um dos ensaios acima. Os serviços de processamento e criopreservação de PBMC também estão disponíveis através da nossa Unidade de Processamento de Sangue.
3. Execute as suas amostras: Uma encomenda online é necessária antes de as amostras poderem ser executadas. O tempo de entrega varia dependendo do tamanho do seu projeto e da carga de trabalho atual; projetos menores geralmente podem ser concluídos dentro de 3-4 semanas da colocação do pedido e entrega das amostras.
4. Análise dos dados: Nós fornecemos uma análise de dados padrão usando o software FlowJo. Um relatório Excel com percentagens de todas as populações de portões, assim como pdf’s dos resultados dos portões e todos os ficheiros fcs, são fornecidos através do Google Drive. Para painéis padrão, os dados do Excel são simultâneamente carregados em nossa base de dados online, Stanford Data Miner, onde podem ser integrados com outros dados HIMC do seu laboratório, bem como dados clínicos/demográficos, se fornecidos. Clique no link de ajuda no canto superior esquerdo da página inicial do Data Miner para obter instruções sobre como usar este sistema.
Consulta estatística está disponível através do HIMC Statistical Consulting Service.
Protocolos
Por favor veja a nossa página de Protocolos para protocolos detalhados do laboratório, bem como descrições breves adequadas para publicações ou pedidos de subsídios.
Informação adicional:
- Revisão de Citometria de Massa (Tendências em Imunologia)
- Análise de dados CyTOF no FlowJo