Met-mutanterna är Met auxotrofa, vilket innebär att de inte kan växa i medier som inte innehåller Met. Auxotrofer är mikroorganismer som inte kan syntetisera ett viktigt näringsämne på grund av en genmutation. Många laboratoriestammar bär på flera mutationer som stör syntesen av viktiga näringsämnen. Eftersom stammen BY4742 till exempel bär på mutationer i generna HIS3, LEU2, LYS2 och URA3 kommer stammen endast att växa i medier som innehåller histidin, leucin, lysin och uracil. Auxotrofa stammar har många användningsområden inom genetiken. Forskare använder ofta auxotrofa stammar som värdar för plasmidtransformation (kapitel 12). De plasmider som används för transformation bär på funktionella alleler av en gen som är defekt i värdstammen, vilket gör det möjligt att välja ut transformanter efter deras förmåga att växa på medier som saknar det viktiga näringsämnet.
Syntetiska medier är ett viktigt verktyg för att odla och studera auxotrofa organismer, eftersom alla komponenter är definierade. Jästforskare har utvecklat en rad olika formuleringar för syntetiska medier. Alla syntetiska medier innehåller en kolkälla (vanligtvis D-glukos), en kvävekälla samt viktiga vitaminer och mineraler. Vitaminerna och mineralerna köps vanligtvis
i en formulering som kallas jästkvävebas (YNB). De tillskott som tillsätts till syntetiska medier kan skräddarsys för att stödja eller selektera mot tillväxten av vissa genotyper. I den här kursen kommer vi att använda mediet Yeast Complete (YC) som stöder tillväxten av de flesta S. cerevisia-stammar. Tillväxthastigheten för vildtypstammar i YC är något långsammare än i rika medier som YPD, men stammarna är livskraftiga under långa perioder. Tabellen på följande sida visar sammansättningen av YC, som innehåller en riklig tillförsel av aminosyror och nukleotidbaser. Förutom det fullständiga YC-mediet kommer vi också att använda selektiva medier där vissa av komponenterna har utelämnats. I den här laborationen kommer vi till exempel att använda YC-Met ”drop-out”-medium, som innehåller alla YC-komponenter i följande tabell, utom metionin.
