Autoradiografi

Autoradiography

Autoradiografi av en Southern Blot

Autoradiografi är en klass av tekniker där positionerna av radioisotopmärkt biologiskt material ger ett autoradiogram (”självbild”). Radioisotoper som 14C, 32P och 35S avger strålning som exponerar fotografisk film eller röntgenfilm. Genom att 32P placeras i DNA:s ryggrad eller 35S i svavelhaltiga aminosyror kan märkta molekyler upptäckas.

Ett Southern Blot-filter placeras i en ljussäker kassettlåda (till vänster) och överlagras med ett ark röntgenfilm. Kassetten stängs och lämnas i flera timmar till flera dagar. Det radioisotopmärkta DNA:t exponerar filmen, som när den framkallats visar ett mönster av svarta band som anger positionerna för det märkta DNA:t i blottet. Utjämningsmarkeringar i tre av de fyra hörnen görs med ett särskilt bläck som också exponerar filmen. Blotet kan anpassas till filmen med hjälp av de tre indexmärkena (med tre märken är endast en anpassning möjlig). I vissa experiment kan man med hjälp av inriktningen lokalisera ett visst DNA-band på blottet och skära ut det för att återvinna DNA:t för vidare experiment.

Lämna en kommentar