Syfte: Nyligen har flera tekniker för omvänd transkription-PCR visat sig vara användbara för att upptäcka cirkulerande mikrometastaser. På detta sätt kunde man dock inte påvisa intakta cellkluster som i djurförsök konstaterats ha ett prognostiskt värde. I denna studie utvärderades och modifierades en kommersiell, cytokeratinbaserad, immunomagnetisk cellseparationsmetod för detektion av intakta cellkluster hos patienter med kolorektalcancer.
Experimentell utformning: Trettiotvå koloncancerpatienter (6 var i Dukes stadium B, 13 i stadium C och 13 i stadium D) och 20 friska donatorprover utvärderades. Immunomagnetisk cellseparation utfördes från buffy coat av perifera blodprover (20 ml) med hjälp av Carcinoma Cell Enrichment Kit (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Tyskland), utan några filtreringssteg. Den anrikade cellfraktionen cytocentrifugerades och märktes immunocytokemiskt med en pancytokeratinantikropp (MNF116; Dako).
Resultat: Av 20 friska prover innehöll 2 en cytokeratinpositiv cell. Av 32 enskilda prover från maligna fall uppvisade 24 cytokeratinpositiva celler. Tumörcellskluster, blandcellsdubbletter (en cytokeratinpositiv och -negativ cell) och blandcellskluster upptäcktes hos 22 av 24 patienter. I sex fall påvisades cytokeratinpositiva dendritiska liknande celler. Uppföljningsdata visar att kemoterapi inte kan förstöra alla cirkulerande tumörcellskluster.
Slutsatser: Med hjälp av de presenterade metoderna kunde vi upptäcka cirkulerande koloncancerceller och cellkluster hos koloncancerpatienter. Liknande cellstrukturer har tidigare beskrivits endast hos råttor. De nuvarande uppgifterna bevisar att sådana strukturer finns även i kolorektalcancer hos människor.