Na-ström i membranblåsor: konsekvenser för kanalrörlighet och patch clamp-inspelning

När sug applicerades på lösa patch clamp-pipetter under inspelning av enzymatiskt dissocierade muskelfibrer, bildades stora membranblåsor i pipetterna. Vi inledde en studie av dessa suginducerade blebbar eftersom jonkanaler i blebbarna skulle komplicera eller möjligen ogiltigförklara loose patch voltage clamp-mätningar av membranströmtäthet. Den låga laterala rörligheten (Stühmer och Almers, 1982) och de branta gradienterna av Na-kanaler vid ändplattan och senan (Caldwell et al., 1986) innebär att Na-kanalerna är tätt bundna till cytoskeletala element och fick oss att förvänta oss få, om ens några, Na-kanaler i blebbarna. Bleb-bildningen gav upphov till en ökning av membrankapacitansen, vilket förväntades av ökningen av membranytan. Bleb-bildningen ökade också Na-strömmen, vilket tyder på att blebbarna innehöll Na-kanaler. Om man antar att den ökade kapacitansen och Na-strömmen berodde på att lipid och Na-kanaler rörde sig från membranen utanför pipetten, förväntade man sig att utkastningen av blebben från pipetten skulle få kapacitansen och Na-strömmen att återgå till sina ursprungliga värden. Kapacitansen återgick till sitt ursprungliga värde, men Na-strömmen var lägre än väntat. Minskningen av Na-strömmen förklaras av att Na-kanaler rör sig från lappmembranet in i blödningen. Normalisering av Na-strömmen från bleb och patch till deras respektive kapacitanser avslöjade att blebmembranet hade en Na-kanaltäthet som var nästan 50 % av den som fanns i det normala ytmembranet. Blebmembranet är således varken fritt från proteiner eller verkligt representativt för det normala ytmembranet från vilket det uppstod. Det är rikt på membranlipider och är relativt proteinfattigt. Två slutsatser kan dras (ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)

Lämna en kommentar