Ett kromatogram är i huvudsak resultatet av en kromatografikörning. Det är en elektronisk fil eller en papperskopia som innehåller den information som genererats under kromatografikörningen.
Det finns många olika varianter på vad som visas på ett kromatogram – beroende på de inställningar som används i varje laboratorium och eventuella myndighetskrav. Som exempel kan det minsta som visas på en GC-körning av ett prov under process vara:
- Providentifiering (Produkt, batchnummer,
- Provinformation (provets vikt eller koncentration)
- Datum och tid då injektionen gjordes
- Analytikerns namn eller identifiering
- Instrumentidentifiering och namnet på den analysmetod som använts
- Filnamn på och plats för de rådata som genererats under körningen
- Kartläggning som visar de genererade topparna och baslinjen, kallas trace
- Resultattabell (innehållande rådata och beräknade data)
Nuförtiden är det i hög grad en automatiserad process att generera en resultattabell, men det har inte alltid varit så enkelt…
Kvadrat papper och sax
Innan dataanalys och digital integration blev standard – fanns ritpapper och sax på varje analytikers hylla.
En diagramskrivare, som var kopplad till detektorn, spelade in spåret direkt på kvadratiskt papper eller ritpapper med hjälp av en bläckpenna. Från spåret fanns det två metoder som vanligen användes för att räkna ut resultaten:
Räkna rutor:
Analytikern använde en linjal och en penna för att rita upp den bästa toppformen (triangeln) och baslinjen. Antalet rutor i varje triangel räknades sedan. Detta antal användes sedan tillsammans med detektorns dämpning och provets sammansättning beräknades.
Skärning och vägning:
En baslinje konstruerades för de toppar som registrerades. Topparna klipptes sedan ut och vägdes. Toppområdet är proportionellt mot vikten, förutsatt att papprets tjocklek och fukthalt är enhetlig. Knep som att fotokopiera spåren och förstora spåren kan användas för att öka precisionen.
Som kan avbildas kan överlappande toppar och prover som innehåller många olika beståndsdelar orsaka en analytiker allvarliga problem. Nu hjälper datorer till att minska felen.
Läsning av ett kromatogram
Även om den moderna instrumenteringen har tagit bort mycket av gissningarna från pappers- och saxdagarna är förmågan att läsa och tolka ett kromatogram lika viktig i dag.
Spåret bör alltid kontrolleras, eftersom det är den första indikationen på om något har gått fel med kromatografin. Enkla kontroller inkluderar:
- Ser baslinjen okej ut, platt med inte för mycket brus?
- Är topparnas former acceptabla? Inte för mycket asymmetri, snygg och skarp och i rätt skala
- Är det rätt antal toppar? Finns det några extra eller saknade toppar?
- Är referens- och internstandardtopparna korrekt identifierade och är retentionstiderna OK?
Även om alla data registreras och beräkningar görs för analytikern är det analytikerns uppgift att se till att inga fel har begåtts. En diskussion om dataanalys i moderna system finns i den här artikeln: Automatiserad analys av mätvärden för HPLC-instrumentering med öppen tillgång.