สารบัญ

Categoria inibitore della beta-lattamasi.

Clavulanate Potassium contiene l’equivalente di non meno del 75,5 per cento e non più del 92,0 per cento di C8H9NO5, calcolato su base anidra.

Confezionamento e conservazione Il Clavulanato di Potassio deve essere conservato in contenitori ben chiusi e conservato ad una temperatura compresa tra 2º e 8º.

Etichettatura L’etichetta sul contenitore riporta (1) le condizioni di conservazione; (2) il grado parenterale o non parenterale.

Identificazione
A. Il cromatogramma del preparato di saggio ottenuto come indicato nel saggio mostra un picco principale per l’acido clavulanico, il cui tempo di ritenzione corrisponde a quello esposto nel cromatogramma del preparato standard ottenuto come indicato nel saggio.
B. Produce le reazioni caratteristiche dei sali di potassio (Appendice 5.1).

pH da 5,5 a 8,0, in una soluzione all’1,0 per cento p/v (Appendice 4.11).

Acqua Non più dell’1,5 per cento p/p (Metodo Karl Fischer, Appendice 4.12).

Limite del potassio clavam-2-carbossilato Non più dello 0,01 per cento. Eseguire la determinazione come descritto nella “Cromatografia liquida ad alta pressione” (Appendice 3.5).
Fase mobile Preparare diidrogenofosfato di sodio 0,1 M, regolare con acido fosforico a un pH di 4,0±0,1 e filtrare attraverso un filtro a membrana di porosità 0,5 μm o più fine. Effettuare le regolazioni se necessario. Soluzione standard Sciogliere Clavam-2-Carbossilato Potassio RS in acqua per ottenere una soluzione con una concentrazione nota di circa 40 μg per ml.
Soluzione di test Trasferire circa 100 mg di Clavulanato Potassio, accuratamente pesati, in un matraccio tarato da 10 ml, sciogliere in e diluire con acqua a volume e mescolare.
Soluzione soluzione Sciogliere una quantità adeguata di Clavulanate Potassium in soluzione standard per ottenere una soluzione contenente circa 1 mg di clavulanate potassio e 30 μg di clavam-2-carbossilato di potassio per ml.
Sistema cromatografico La procedura cromatografica può essere effettuata utilizzando (a) una colonna in acciaio inossidabile (30 cm × 4 mm) confezionata con ottadecilsilano chimicamente legato alla silice porosa o microparticelle di ceramica (3 a 10 μm) (b) fase mobile ad una velocità di flusso di 0,5 ml al minuto, e (c) un fotometro ultravioletto impostato a 210 nm.
Per determinare l’idoneità del sistema cromatografico, cromatografo Soluzione standard, e registrare le risposte di picco come indicato sotto Procedura: il fattore di simmetria non è più di 1,5 e la deviazione standard relativa per iniezioni replicate non è più di 2,0 per cento. Cromatografo Soluzione di risoluzione, e registrare le risposte dei picchi come indicato al punto Procedura: il fattore di risoluzione tra i picchi dell’acido clavam-2-carbossilico e dell’acido clavulanico non è inferiore a 1,0.
Procedura Iniettare separatamente volumi uguali (circa 20 μl) di soluzione standard e soluzione di test nel cromatografo, registrare i cromatogrammi e misurare le risposte dei picchi principali. I tempi di ritenzione relativi sono circa 0,7 per l’acido clavam-2-carbossilico e 1,0 per l’acido clavulanico. Calcolare la percentuale di potassio clavam-2-carbossilato

Limite di metanolo e terz-butilammina Non più di 0,1 per cento p/p di metanolo o non più di 0,2 per cento p/p di terz-butilammina. Eseguire la determinazione come descritto nella “Gascromatografia” (Appendice 3.4).
Soluzione standard In un matraccio tarato da 100 ml contenente 50,0 ml di idrossido di sodio 3 M aggiungere circa 6 ml di metanolo e 12 ml di terz-butilammina, entrambi pesati accuratamente, diluire con idrossido di sodio 3 M a
volume e mescolare. Trasferire 10,0 ml di questa soluzione madre in un secondo matraccio tarato da 100 ml, diluire con idrossido di sodio 3 M a volume e mescolare. Trasferire 10,0 ml di questa soluzione in un terzo matraccio tarato da 100 ml, diluire con idrossido di sodio 3 M a volume e mescolare. Trasferire 7,0 ml di questa soluzione in un quarto matraccio tarato da 100 ml, aggiungere 3,0 ml di idrossido di sodio 3 M, diluire con 4-metil-2-pentanone a volume e mescolare. Lasciare che le fasi si separino e utilizzare lo strato chiaro di metilisobutilchetone come soluzione standard. Questa soluzione contiene circa 36,6 μg di metanolo e 63,8 μg di tertbutilammina per ml. Utilizzare questa soluzione entro 5 ore.
Soluzione di test Trasferire circa 3 g di Clavulanate Potassium, accuratamente pesato, in un matraccio tarato da 100 ml, aggiungere 10,0 ml di idrossido di sodio 3 M, e agitare fino a scioglimento. Lasciare raffreddare a bagnomaria freddo, diluire con 4-metil-2-pentanone a volume, tappare il matraccio e agitare vigorosamente per 3 minuti, con sfiati occasionali. Lasciare che le fasi si separino e usare lo strato chiaro di metilisobutilchetone come soluzione di prova. Utilizzare questa soluzione entro 5 ore.
Sistema cromatografico La procedura cromatografica può essere eseguita utilizzando (a) una colonna di vetro (30 m × 0,32 mm) rivestita con fase stazionaria in olio di dimetilpolisilossano e viene mantenuta a 40º, poi programmata per aumentare ad una velocità di 55º al minuto fino a 200º, e mantenuta a tale temperatura per 4 minuti, (b) la porta di iniezione e il blocco rivelatore vengono mantenuti a 150º, (c) azoto come gas di trasporto, e (d) un rivelatore a ionizzazione di fiamma. Per determinare l’idoneità del sistema cromatografico, cromatografare la soluzione standard e registrare le risposte dei picchi di metanolo, tert-butilammina e metilisobutilchetone come indicato per la procedura: il fattore di simmetria non è più di 1.6 per i picchi del metanolo e della terz-butilammina; l’efficienza della colonna non è inferiore a 25.000 piastre teoriche; il fattore di risoluzione tra il picco del metanolo e quello della terz-butilammina non è inferiore a 20 e tra il picco della terz-butilammina e quello del 4-metil-2-pentanone non è inferiore a 10; e la deviazione standard relativa per iniezioni replicate non è superiore al 10%.

Procedura Iniettare separatamente volumi uguali (circa 1 μl) di soluzione standard e di soluzione test nel cromatografo, registrare i cromatogrammi e misurare le aree delle risposte dei picchi del metanolo e della terz-butilammina.
Calcolo Calcolare le percentuali di metanolo e di terz-butilammina nel Clavulanato di potassio.
Purezza cromatografica Effettuare la determinazione come descritto nella “Cromatografia liquida ad alta pressione” (Appendice 3.5).
Soluzione A Preparare una soluzione di diidrogenofosfato di sodio 0,05 M, regolare con acido fosforico ad un pH di 4,0±0,1, e filtrare attraverso un filtro di porosità 0,5-μm o più fine.
Soluzione B Preparare una miscela di volumi uguali di soluzione A e metanolo.
Fase mobile Utilizzare miscele variabili di soluzione A e soluzione B come indicato per il sistema cromatografico. Fare le regolazioni ad entrambe le soluzioni come necessario.
Soluzione standard Preparare una soluzione di Clavulanate Lithium RS in soluzione A avente una concentrazione nota di circa 0,1 mg per ml.
Soluzione di test Preparare una soluzione di Clavulanate Potassium in soluzione A contenente 10.0 mg per ml.
Soluzione Preparare una soluzione di Clavulanato litio RS e amoxicillina in soluzione A contenente 0,1 mg di ciascuno per ml.
Sistema cromatografico La procedura cromatografica può essere eseguita utilizzando (a) una colonna di acciaio inossidabile (10 cm × 4. 6 mm) riempita con ottavo di etilene.6 mm) imballata con ottadecilsilano chimicamente legato a silice porosa o microparticelle di ceramica (da 3 a 10 μm) ed è mantenuta ad una temperatura costante di circa 40º, (b) fase mobile ad una velocità di flusso di circa 1 ml al minuto, e (c) un fotometro ultravioletto impostato a 230 nm.
Il sistema è programmato per fornire una fase mobile costituita da miscele variabili di soluzione A e soluzione B. Il sistema è equilibrato per 15 minuti con il 100 per cento di soluzione A, e mantenuto a questa composizione per 4 minuti dopo l’iniezione della soluzione in esame, dopo di che la proporzione di soluzione B viene aumentata linearmente da 0 a 50 per cento in un periodo di 11 minuti. Il sistema viene mantenuto a questa composizione per 3 minuti, e poi viene cambiato alla soluzione A al 100% per 6 minuti. Per determinare l’idoneità del sistema cromatografico, cromatografare la soluzione di risoluzione e registrare le risposte dei picchi come indicato per la procedura: i tempi di ritenzione relativi sono circa 2,5 per l’amoxicillina e 1,0 per l’acido clavulanico; il fattore di simmetria per il picco dell’acido clavulanico non è più di 2,0; l’efficienza della colonna determinata dal picco dell’acido clavulanico non è inferiore a 2000 piastre teoriche; e il fattore di risoluzione tra il picco dell’acido clavulanico e quello dell’amoxicillina non è inferiore a 13. Cromatografare la soluzione standard e registrare le risposte dei picchi come indicato per la procedura: la deviazione standard relativa per le iniezioni replicate non è superiore al 2 per cento.
Procedura Iniettare separatamente volumi uguali (circa 20 μl) di soluzione standard e soluzione di test nel cromatografo, registrare i cromatogrammi e misurare le risposte dei picchi.
Calcolo Calcolare la percentuale, in termini di equivalente di potassio clavulanato, di ogni impurità nel Potassio Clavulanato preso dall’espressione:

10(237.3/205.1)(C)(ri/rS),

in cui 237.3 è il peso molecolare del potassio clavulanato; 205.1 è il peso molecolare del litio clavulanato; C è la concentrazione, in mg per ml, di Clavulanate Potassium RS nella soluzione standard; ri è la risposta del picco di un singolo picco di impurità nel cromatogramma ottenuto dalla soluzione di prova; e rS è la risposta del picco di acido clavulanico nel cromatogramma ottenuto dalla soluzione standard. La somma di tutti i picchi di impurità non è più del 2 per cento.

Saggio Eseguire la determinazione come descritto nella “Cromatografia liquida ad alta pressione” (appendice 3.5).
pH 4.4 Tampone di sodio fosfato Sciogliere 7.8 g di diidrogenofosfato di sodio in 900 ml di acqua, regolare con acido fosforico o idrossido di sodio 10 M fino a un pH di 4,4±0,1, diluire con acqua fino a 1000 ml e mescolare.
Fase mobile Preparare una miscela adeguata di 95 volumi di tampone fosfato di sodio a pH 4,4 e 5 volumi di metanolo. Fare le regolazioni se necessario.
Preparazione standard Sciogliere una quantità accuratamente pesata di Clavulanate Lithium RS in acqua per ottenere una soluzione con una concentrazione nota di circa 250 μg per ml.
Preparazione di analisi Trasferire circa 50 mg di Potassio Clavulanato, accuratamente pesato, in un matraccio tarato da 200 ml, sciogliere in e diluire con acqua a volume, e mescolare.
Soluzione Soluzione Dissolvere una quantità adeguata di amoxicillina in preparazione standard per ottenere una soluzione contenente circa 0,5 mg di amoxicillina e 250 μg di litio clavulanato per ml.
Sistema cromatografico La procedura cromatografica può essere effettuata utilizzando (a) una colonna in acciaio inossidabile (30 cm × 4 mm) confezionata con ottadecilsilano chimicamente legato alla silice porosa o microparticelle di ceramica (3 a 10 μm), (b) fase mobile ad una velocità di flusso di circa 2 ml al minuto, e (c) un fotometro ultravioletto impostato a 220 nm.
Per determinare l’idoneità del sistema cromatografico, cromatografo Soluzione di risoluzione, e registrare le risposte di picco come diretto sotto Procedura: il fattore di risoluzione tra i picchi amoxicillina e acido clavulanico non è inferiore a 3,5 e i tempi di ritenzione relativi sono circa 0,5 per l’acido clavulanico e 1,0 per amoxicillina. Cromatografo Preparazione standard, e registrare le risposte di picco come diretto sotto Procedura: il fattore di simmetria per il picco di acido clavulanico non è più di 1,5 e la deviazione standard relativa per iniezioni replicate non è più di 2,0 per cento.
Procedura Iniettare separatamente volumi uguali (circa 20 μl) della preparazione standard e della preparazione del saggio nel cromatografo, registrare i cromatogrammi e misurare le risposte per i picchi principali.
Calcolo Calcolare il contenuto di C8H9NO5 nel Clavulanato di Potassio preso, utilizzando il contenuto dichiarato di C8H9NO5 nel Clavulanato di Litio RS.