I mutanti met sono Met auxotrofi, cioè non sono in grado di crescere in mezzi che non contengono Met. Gli auxotrofi sono microrganismi che non sono in grado di sintetizzare un nutriente essenziale a causa di una mutazione genica. Molti ceppi di laboratorio portano mutazioni multiple che interferiscono con la sintesi di nutrienti essenziali. Per esempio, poiché il ceppo BY4742 porta mutazioni nei geni HIS3, LEU2, LYS2 e URA3, il ceppo crescerà solo in mezzi contenenti istidina, leucina, lisina e uracile. I ceppi auxotrofi hanno molti usi nella genetica. I ricercatori spesso usano i ceppi auxotrofi come ospiti per la trasformazione dei plasmidi (Capitolo 12). I plasmidi usati per la trasformazione portano alleli funzionali di un gene che è difettoso nel ceppo ospite, rendendo possibile selezionare i trasformanti in base alla loro capacità di crescere su terreni privi del nutriente essenziale.
I terreni sintetici sono uno strumento essenziale per coltivare e studiare gli auxotrofi, perché tutti i componenti sono definiti. I ricercatori del lievito hanno sviluppato una varietà di formulazioni diverse per i mezzi sintetici. Tutti i mezzi sintetici contengono una fonte di carbonio (di solito D-glucosio), una fonte di azoto e vitamine e minerali essenziali. Le vitamine e i minerali sono di solito acquistati
in una formulazione nota come lievito azoto base (YNB). Gli integratori aggiunti ai mezzi sintetici possono essere personalizzati per supportare o selezionare la crescita di particolari genotipi. In questo corso, useremo il terreno Yeast Complete (YC) che supporta la crescita della maggior parte dei ceppi di S. cerevisia. Il tasso di crescita dei ceppi wild type in YC è un po’ più lento di quello in terreni ricchi come YPD, ma i ceppi sono vitali per lunghi periodi di tempo. La tabella nella pagina seguente mostra la composizione di YC, che include una ricca fornitura di aminoacidi e basi nucleotidiche. Oltre al mezzo YC completo, useremo anche mezzi selettivi in cui alcuni componenti sono stati omessi. Per esempio, in questo laboratorio, useremo il terreno YC-Met “drop-out”, che contiene tutti i componenti YC della tabella seguente, tranne la metionina.
