Un cromatogramma è essenzialmente l’output di una corsa cromatografica. Si tratta di un file elettronico o di una copia cartacea contenente le informazioni generate durante l’esecuzione della cromatografia.
Ci sono molte variazioni diverse su ciò che viene mostrato su un cromatogramma – a seconda delle impostazioni utilizzate in ogni laboratorio e di eventuali requisiti normativi. Come esempio, il minimo mostrato su una corsa GC di un campione in-process potrebbe essere:
- Identificazione del campione (prodotto, numero di lotto,
- Informazioni sul campione (peso o concentrazione del campione)
- Data e ora dell’iniezione
- Nome o identificazione dell’analista
- Identificazione dello strumento e nome del metodo analitico usato
- Nome del file e posizione dei dati grezzi generati durante la corsa
- Registrazione del grafico che mostra i picchi generati e la linea base, nota come traccia
- Tabella dei risultati (contenente dati grezzi e dati calcolati)
Oggi è un processo molto automatizzato per generare una tabella dei risultati, ma non è sempre stato così semplice…
Carta quadrata e forbici
Prima che l’analisi dei dati e l’integrazione digitale diventassero lo standard – carta millimetrata e forbici si trovavano sullo scaffale di ogni analista.
Un registratore, collegato al rilevatore, registrava la traccia direttamente su carta quadrata o carta millimetrata usando una penna a inchiostro. Dalla traccia, c’erano due metodi comunemente usati per elaborare i risultati:
Conteggio dei quadrati:
L’analista usava un righello e una penna per disegnare la migliore forma del picco (triangolo) e la linea di base. Il numero di quadrati in ogni triangolo è stato poi contato. Questo conteggio è stato poi utilizzato insieme all’attenuazione del rivelatore e la composizione del campione è stata calcolata.
Taglio e pesatura:
È stata costruita una linea di base per i picchi che sono stati registrati. I picchi sono stati poi tagliati e pesati. L’area del picco è proporzionale al peso, a condizione che lo spessore della carta e il contenuto di umidità siano uniformi. Trucchi come la fotocopiatura della traccia e l’ingrandimento della traccia potevano essere usati per aumentare la precisione.
Come si può immaginare, i picchi che si sovrappongono e i campioni che contengono molti costituenti diversi potrebbero causare seri problemi a un analista. Ora, i computer aiutano a ridurre gli errori.
Lettura di un cromatogramma
Anche se la strumentazione moderna ha rimosso molte delle congetture dei giorni di carta e forbici, la capacità di leggere e interpretare un cromatogramma è altrettanto importante oggi.
La traccia dovrebbe essere sempre controllata, poiché sarà la prima indicazione se qualcosa è andato storto con la cromatografia. Semplici controlli includono:
- La linea di base sembra OK, piatta con non troppo rumore?
- Le forme dei picchi sono accettabili? Non c’è troppa asimmetria, bella e nitida e in scala
- C’è il giusto numero di picchi? Qualche picco in più o mancante?
- I picchi di riferimento e dello standard interno sono identificati correttamente e i tempi di ritenzione sono OK?
Anche se i dati sono tutti registrati e i calcoli sono fatti per l’analista, è compito dell’analista assicurarsi che non siano stati fatti errori. Una discussione sull’analisi dei dati nei sistemi moderni si trova in questo articolo: Automated Analysis of Open-Access HPLC Instrumentation Metrics.