Scopo: Recentemente diverse tecniche di trascrizione inversa-PCR si sono dimostrate utili per il rilevamento di micrometastasi circolanti. Tuttavia, in questo modo cluster di cellule intatte che sono stati trovati in esperimenti animali di valore prognostico non potrebbe essere rilevato. In questo studio, la valutazione e la modifica di un metodo di separazione cellulare immunomagnetico commerciale, basato sulla citocheratina, è stata eseguita per il rilevamento di cluster di cellule intatte in pazienti con carcinoma colorettale.
Disegno sperimentale: Sono stati valutati trentadue pazienti con cancro al colon (6 erano allo stadio B di Dukes, 13 allo stadio C e 13 allo stadio D) e 20 campioni di donatori sani. La separazione cellulare immunomagnetica è stata eseguita dal buffy coat dei campioni di sangue periferico (20 ml) utilizzando il kit di arricchimento delle cellule del carcinoma (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germania), evitando qualsiasi fase di filtraggio. La frazione cellulare arricchita è stata citocentrifugata e marcata immunocitochimicamente usando un anticorpo della pancitoceratina (MNF116; Dako).
Risultati: Su 20 campioni sani, 2 contenevano una sola cellula citocheratina-positiva. Di 32 campioni singoli da casi maligni, 24 hanno mostrato cellule citocheratine-positive. Cluster di cellule tumorali, doppiette di cellule miste (una cellula positiva alla citocheratina e una negativa) e cluster di cellule miste sono stati rilevati in 22 dei 24 pazienti. In sei casi, sono state rilevate cellule dendritiche positive alla citocheratina. I dati di follow-up indicano che la chemioterapia non può distruggere tutti i cluster di cellule tumorali circolanti.
Conclusioni: Utilizzando i metodi presentati, abbiamo potuto rilevare le cellule tumorali circolanti del colon e i cluster di cellule nei pazienti con carcinoma del colon. Strutture cellulari simili sono state descritte in precedenza solo nei ratti. I dati attuali dimostrano che tali strutture sono presenti anche nel cancro colorettale umano.