Inhibitor beta-laktamázy.
Klavulanát draselný obsahuje ekvivalent nejméně 75,5 % a nejvýše 92,0 % C8H9NO5, počítáno na bezvodou bázi.
Balení a uchovávání Klavulanát draselný se uchovává v těsně uzavřených obalech a skladuje se při teplotě od 2º do 8º.
Označení Na obalu se uvádí: 1) podmínky uchovávání; 2) parenterální nebo neparenterální jakost.
Identifikace
A. Chromatogram testovacího přípravku získaný podle pokynů v testu vykazuje hlavní pík pro kyselinu klavulanovou, jehož retenční čas odpovídá retenčnímu času v chromatogramu standardního přípravku získaného podle pokynů v testu.
B. Poskytuje reakce charakteristické pro draselné soli (dodatek 5.1).
PH 5,5 až 8,0, v 1,0 % hm. roztoku (dodatek 4.11).
Voda Ne více než 1,5 % hm. (metoda Karla Fischera, dodatek 4.12).
Limit klavam-2-karboxylátu draselného Ne více než 0,01 %. Proveďte stanovení podle popisu ve „Vysokotlaké kapalinové chromatografii“ (dodatek 3.5).
Mobilní fáze Připravte 0,1 M dihydrogenfosforečnan sodný, upravte kyselinou fosforečnou na pH 4,0 ± 0,1 a přefiltrujte přes membránový filtr o pórovitosti 0,5 μm nebo jemnější. V případě potřeby proveďte úpravy. Standardní roztok Rozpusťte Clavam-2-Carboxylate Potassium RS ve vodě, abyste získali roztok o známé koncentraci asi 40 μg na ml.
Testovací roztok Přeneste asi 100 mg přesně odváženého klavulanistanu draselného do 10ml odměrné baňky, rozpusťte a zřeďte vodou na objem a promíchejte.
Roztok pro roztok Rozpusťte vhodné množství klavulananu draselného ve standardním roztoku tak, abyste získali roztok obsahující asi 1 mg klavulananu draselného a 30 μg klavam-2-karboxylátu draselného na 1 ml.
Chromatografický systém Chromatografický postup může být proveden za použití a) kolony z nerezové oceli (30 cm × 4 mm) naplněné oktadecylsilanem chemicky vázaným na porézní oxid křemičitý nebo keramické mikročástice (3 až 10 μm) b) mobilní fáze s průtokem 0,5 ml za minutu a c) ultrafialového fotometru nastaveného na 210 nm.
K určení vhodnosti chromatografického systému se chromatografuje standardní roztok a zaznamenávají se odezvy píků podle pokynů v části Postup: faktor symetrie není větší než 1,5 a relativní směrodatná odchylka pro opakované nástřiky není větší než 2,0 %. Chromatografujte roztok pro rozlišení a zaznamenejte odezvy píků podle pokynů v části Postup: faktor rozlišení mezi píky kyseliny klavam-2-karboxylové a kyseliny klavulanové není menší než 1,0.
Postup Odděleně vstříkněte do chromatografu stejné objemy (asi 20 μl) standardního a zkušebního roztoku, zaznamenejte chromatogramy a změřte odezvy hlavních píků. Relativní retenční časy jsou přibližně 0,7 pro kyselinu klavam-2-karboxylovou a 1,0 pro kyselinu klavulanovou. Vypočítejte procento klavam-2-karboxylátu draselného
Mezní obsah methanolu a terc-butylaminu Ne více než 0,1 % hm. methanolu nebo ne více než 0,2 % hm. terc-butylaminu. Stanovení se provádí podle popisu v „Plynové chromatografii“ (dodatek 3.4).
Standardní roztok Do 100 ml odměrné baňky obsahující 50,0 ml 3 M hydroxidu sodného se přidá asi 6 ml methanolu a 12 ml terc-butylaminu, obojí se přesně odváží, zředí se 3 M hydroxidem sodným na
objem a promíchá. Přeneste 10,0 ml tohoto základního roztoku do druhé 100ml odměrné baňky, zřeďte 3 M hydroxidem sodným na objem a promíchejte. Přeneste 10,0 ml tohoto roztoku do třetí 100ml odměrné baňky, zřeďte 3 M hydroxidem sodným na objem a promíchejte. Přeneste 7,0 ml tohoto roztoku do čtvrté 100ml odměrné baňky, přidejte 3,0 ml 3 M hydroxidu sodného, zřeďte 4-methyl-2-pentanonem na objem a promíchejte. Nechte fáze oddělit a jako standardní roztok použijte čirou vrstvu methylisobutylketonu. Tento roztok obsahuje přibližně 36,6 μg methanolu a 63,8 μg tertbutylaminu na ml. Tento roztok použijte do 5 hodin.
Testovací roztok Přeneste asi 3 g přesně odváženého klavulananu draselného do 100 ml odměrné baňky, přidejte 10,0 ml 3 M hydroxidu sodného a protřepejte do rozpuštění. Nechte vychladnout ve studené vodní lázni, zřeďte 4-methyl-2-pentanonem na objem, baňku zazátkujte a za občasného odvzdušnění intenzivně třepejte po dobu 3 minut. Nechte fáze oddělit a jako zkušební roztok použijte čirou vrstvu methylisobutylketonu. Tento roztok se použije do 5 hodin.
Chromatografický systém Chromatografický postup lze provést za použití a) skleněné kolony (30 m × 0,32 mm) potažené dimethylpolysiloxanovou olejovou stacionární fází, která se udržuje při teplotě 40º, pak se naprogramuje tak, aby se zvyšovala rychlostí 55º za minutu na 200º, a při této teplotě se udržuje po dobu 4 minut, b) injekční otvor a blok detektoru se udržují při teplotě 150º, c) dusík jako nosný plyn a d) plamenový ionizační detektor. Pro určení vhodnosti chromatografického systému se chromatografuje standardní roztok a zaznamenají se odezvy píků methanolu, terc-butylaminu a methylisobutylketonu podle pokynů pro postup: faktor symetrie není větší než 1.6 pro píky methanolu a terc-butylaminu; účinnost kolony není menší než 25 000 teoretických destiček; rozlišovací faktor mezi píkem methanolu a píkem terc-butylaminu není menší než 20 a mezi píkem terc-butylaminu a píkem 4-methyl-2-pentanonu není menší než 10 a relativní směrodatná odchylka pro opakované nástřiky není větší než 10 %.
Postup Do chromatografu se odděleně vstříknou stejné objemy (asi 1 μl) standardního roztoku a zkušebního roztoku, chromatogramy se zaznamenají a změří se plochy odezvy píků methanolu a terc-butylaminu.
Výpočet Vypočítejte procentuální zastoupení methanolu a terc-butylaminu v klavulananu draselném.
Chromatografická čistota Stanovení se provede podle popisu ve „Vysokotlaké kapalinové chromatografii“ (příloha 3).5).
Roztok A Připravte roztok 0,05 M dihydrogenfosforečnanu sodného, upravte kyselinou fosforečnou na pH 4,0 ± 0,1 a přefiltrujte přes filtr o pórovitosti 0,5 μm nebo jemnější.
Roztok B Připravte směs stejných objemů roztoku A a methanolu.
Mobilní fáze Použijte proměnlivé směsi roztoku A a roztoku B podle pokynů pro chromatografický systém. Podle potřeby proveďte úpravy obou roztoků.
Standardní roztok Připravte roztok klavulanistanu lithného RS v roztoku A o známé koncentraci přibližně 0,1 mg na ml.
Testovací roztok Připravte roztok klavulanistanu draselného v roztoku A obsahujícím 10 mg na ml.0 mg na ml.
Roztok k rozpuštění Připravte roztok klavulananu lithného RS a amoxicilinu v roztoku A o koncentraci 0,1 mg každého z nich na ml.
Chromatografický systém Chromatografický postup může být proveden za použití a) kolony z nerezové oceli (10 cm × 4.6 mm) naplněné oktadecylsilanem chemicky vázaným na porézní oxid křemičitý nebo keramické mikročástice (3 až 10 μm) a udržované při konstantní teplotě asi 40º, b) mobilní fáze s průtokem asi 1 ml za minutu a c) ultrafialového fotometru nastaveného na 230 nm.
Systém je naprogramován tak, aby poskytoval mobilní fázi sestávající z proměnlivé směsi roztoku A a roztoku B. Systém se vyrovnává po dobu 15 minut se 100 % roztoku A a udržuje se v tomto složení po dobu 4 minut po nástřiku zkoušeného roztoku, poté se podíl roztoku B lineárně zvyšuje od 0 do 50 % po dobu 11 minut. Systém se udržuje v tomto složení po dobu 3 minut a poté se na 6 minut změní na 100 % roztok A. Pro určení vhodnosti chromatografického systému se chromatografuje roztok Resolution a zaznamenají se odezvy píků podle pokynů pro postup: relativní retenční časy jsou přibližně 2,5 pro amoxicilin a 1,0 pro kyselinu klavulanovou; faktor symetrie pro pík kyseliny klavulanové není větší než 2,0; účinnost kolony stanovená z píku kyseliny klavulanové není menší než 2000 teoretických destiček; a rozlišovací faktor mezi píkem kyseliny klavulanové a píkem amoxicilinu není menší než 13. Pro stanovení vhodnosti chromatografického systému se použije roztok Resolution. Chromatografujte standardní roztok a zaznamenejte odezvy píků podle pokynů pro Postup: relativní směrodatná odchylka pro opakované nástřiky není větší než 2 %.
Postup Do chromatografu se odděleně nastříknou stejné objemy (asi 20 μl) standardního a zkušebního roztoku, zaznamenají se chromatogramy a změří se odezvy píků.
Výpočet Vypočítejte procentuální podíl každé nečistoty v ekvivalentu klavulanistanu draselného v roztoku klavulanistanu draselného podle výrazu:
10(237.3/205.1)(C)(ri/rS),
v němž 237.3 je molekulová hmotnost klavulanistanu draselného; 205.1 je molekulová hmotnost klavulananu lithného; C je koncentrace v mg na ml klavulananu draselného RS ve standardním roztoku; ri je odezva píku jednotlivé nečistoty v chromatogramu získaném ze zkušebního roztoku; a rS je odezva píku kyseliny klavulanové v chromatogramu získaném ze standardního roztoku. Součet všech píků nečistot není větší než 2 %.
Posouzení Proveďte stanovení podle popisu ve „Vysokotlaké kapalinové chromatografii“ (dodatek 3.5).
pH 4,4 Fosforečnanový pufr sodný Rozpusťte 7. roztok.8 g dihydrogenfosforečnanu sodného v 900 ml vody, upravte kyselinou fosforečnou nebo 10 M hydroxidem sodným na pH 4,4 ± 0,1, zřeďte vodou na 1000 ml a promíchejte.
Mobilní fáze Připravte vhodnou směs 95 objemů pufru fosforečnanu sodného o pH 4,4 a 5 objemů methanolu. V případě potřeby proveďte úpravy.
Standardní příprava Rozpusťte přesně odvážené množství Clavulanate Lithium RS ve vodě, abyste získali roztok o známé koncentraci přibližně 250 μg na ml.
Přípravek k analýze Přeneste přesně odvážených asi 50 mg klavulanistanu draselného do 200 ml odměrné baňky, rozpusťte a zřeďte vodou na objem a promíchejte.
Roztok k rozpuštění Rozpusťte vhodné množství amoxicilinu ve standardním přípravku, abyste získali roztok obsahující asi 0,5 mg amoxicilinu a 250 μg klavulanistanu lithného na ml.
Chromatografický systém Chromatografický postup může být proveden za použití a) kolony z nerezové oceli (30 cm × 4 mm) naplněné oktadecylsilanem chemicky vázaným na porézní křemenné nebo keramické mikročástice (3 až 10 μm), b) mobilní fáze s průtokem přibližně 2 ml za minutu a c) ultrafialového fotometru nastaveného na 220 nm.
K určení vhodnosti chromatografického systému chromatografujte Rozlišovací roztok a zaznamenejte odezvy píků podle pokynů v části Postup: rozlišovací faktor mezi píky amoxicilinu a kyseliny klavulanové není menší než 3,5 a relativní retenční časy jsou přibližně 0,5 pro kyselinu klavulanovou a 1,0 pro amoxicilin. Chromatografujte standardní přípravek a zaznamenejte odezvy píků podle pokynů v části Postup: faktor symetrie pro pík kyseliny klavulanové není větší než 1,5 a relativní směrodatná odchylka pro opakované nástřiky není větší než 2,0 %.
Postup Do chromatografu se odděleně vstříknou stejné objemy (asi 20 μl) standardního přípravku a zkušebního přípravku, zaznamenají se chromatogramy a změří se odezvy hlavních píků.
Výpočet Vypočítejte obsah C8H9NO5 v odebraném klavulananu draselném pomocí deklarovaného obsahu C8H9NO5 v klavulananu lithném RS.
.