6.3: Auxotrofové a selektivní média

Mutanti Met jsou Met auxotrofové, což znamená, že nejsou schopni růst na médiu, které Met neobsahuje. Auxotrofy jsou mikroorganismy, které nejsou schopny syntetizovat základní živinu kvůli genové mutaci. Mnoho laboratorních kmenů nese několik mutací, které brání syntéze základních živin. Například protože kmen BY4742 nese mutace v genech HIS3, LEU2, LYS2 a URA3, kmen poroste pouze na médiu obsahujícím histidin, leucin, lysin a uracil. Auxotrofní kmeny mají v genetice mnohostranné využití. Výzkumníci často používají auxotrofní kmeny jako hostitele pro transformaci plazmidů (kapitola 12). Plazmidy používané pro transformaci nesou funkční alely genu, který je v hostitelském kmeni defektní, což umožňuje výběr transformantů podle jejich schopnosti růst na médiích s nedostatkem základní živiny.

Syntetická média jsou základním nástrojem pro kultivaci a studium auxotrofů, protože všechny jejich složky jsou definovány. Výzkumníci zabývající se kvasinkami vyvinuli řadu různých složení syntetických médií. Všechna syntetická média obsahují zdroj uhlíku (obvykle D-glukózu), zdroj dusíku a základní vitaminy a minerální látky. Vitamíny a minerály se obvykle nakupují
ve složení známém jako kvasinkový dusíkatý základ (YNB). Doplňky přidávané do syntetických médií mohou být přizpůsobeny tak, aby podporovaly nebo bránily růstu určitých genotypů. V tomto kurzu budeme používat médium Yeast Complete (YC), které podporuje růst většiny kmenů S. cerevisiaestra. Rychlost růstu kmenů divokého typu v YC je poněkud pomalejší než v bohatých médiích, jako je YPD, ale kmeny jsou životaschopné po dlouhou dobu. Tabulka na následující straně ukazuje složení YC, které obsahuje bohatý přísun aminokyselin a nukleotidových bází. Kromě kompletního média YC budeme používat také selektivní média, ve kterých byly některé složky vynechány. V této laboratoři budeme například používat „vysazené“ médium YC-Met, které obsahuje všechny složky YC uvedené v následující tabulce kromě methioninu.

.

Napsat komentář