Antikatabolická role hovězího laktoferricinu v chrupavce

Hovězí laktoferricin (LfcinB) je multifunkční peptid odvozený od hovězího laktoferinu, který vykazuje antibakteriální, antimykotické, antivirové, protinádorové a imunomodulační aktivity. V poslední době se studie zaměřují na antikatabolický a protizánětlivý potenciál LfcinB. LfcinB je schopen modulovat účinky cytokinů, jako je IL-1 a fibroblastový růstový faktor 2, a také podporovat specifické anabolické faktory chrupavky. Tyto vlastnosti jsou důležité zejména pro udržení homeostázy chrupavky a prevenci katabolického stavu, který vede ke klinické patologii. Tento přehled se zaměřuje na nejnovější literaturu objasňující úlohu LfcinB v prevenci degradace chrupavky.

Úvod

Degenerativní onemocnění chrupavky, jako je osteoartróza (OA) kloubů a degenerativní onemocnění plotének (DDD) páteře, jsou rozšířená onemocnění, která mají významný dopad na dnešní společnost. OA je hlavní příčinou invalidity u starší populace (1) a DDD přispívá k vysilující povaze chronické bolesti zad (2-4). V současné době je patogeneze těchto dvou stavů z velké části neznámá, oba však zahrnují postupné zhoršování a degradaci chrupavčité tkáně. Nejnovější literatura se zaměřuje na pochopení mnoha patofyziologických procesů, které se podílejí na degradaci chrupavky, se záměrem vyvinout nové terapie zaměřené na zpomalení a/nebo zvrácení těchto onemocnění.

Za normálních podmínek udržují kloubní chondrocyty i buňky intervertebrální ploténky (IVD) dynamickou rovnováhu mezi syntézou a odbouráváním složek extracelulární matrix (ECM) (5, 6). U degenerativních stavů dochází k narušení rovnováhy matrix, což vede k postupnému úbytku chrupavčité tkáně, potlačení produkce proteoglykanů (PG) a klonální expanzi buněk v ochuzených oblastech. Metabolismus chondrocytů je nerovnovážný v důsledku nadměrné produkce katabolických mediátorů, včetně matrixových metaloproteáz (MMP), agrekanáz (ADAMTS) a dalších cytokinů a růstových faktorů uvolňovaných chondrocyty, které napomáhají destrukci ECM (7-9). Identifikace nových růstových faktorů nebo mediátorů, které biochemicky potlačují katabolické a/nebo antianabolické dráhy podílející se na degradaci chrupavky, proto může posunout homeostázu směrem k proanabolickému stavu, což může sloužit jako jedna z terapeutických strategií ke zpomalení OA i DDD.

Zajímavé je, že několik nedávných studií odhalilo potenciál glykoproteinu bovinního laktoferinu (LfcinB) a jeho prekurzoru bovinního laktoferinu (bLf) vyvolat antikatabolické, proanabolické a protizánětlivé účinky v chrupavce. BLf, který byl poprvé identifikován v hovězím mléce v roce 1939 (10), je glykoprotein o velikosti 80 kDa, který se nachází ve slizničních sekretech, synoviálních tekutinách, plazmě a neutrofilních granulích (11) a hraje klíčovou roli v různých antibakteriálních, antivirových, antikarcinogenních a protizánětlivých cestách (12). Nedávno bylo zjištěno, že bLF má terapeutickou hodnotu u muskuloskeletální etiologie. Například perorální podávání bLF na modelu potkaní adjuvantní artritidy potlačilo rozvoj artritidy a hyperalgezie (13), což naznačuje jeho antikatabolické a protizánětlivé vlastnosti v synoviálních kloubech. Tyto výsledky potvrzují další zjištění, kdy periartikulární injekce lidského LF potlačily lokální zánět v modelu myší septické artritidy (14).

LfcinB vzniká pepsinem zprostředkovaným štěpením glykoproteinu bLf, klíčového člena transferinové rodiny. LfcinB byl získán z kyselého žaludečního obsahu člověka po trávení bLf (15). Podobně jako bLF má LfcinB řadu účinků v několika různých tkáních a organismech. Antibakteriální účinky LfcinB již byly dobře zdokumentovány. Po uvolnění z mateřského proteinu se LfcinB mění z α-helikální struktury na amfipatickou β-vlásenkovou strukturu, což umožňuje peptidu vázat se na bakteriální membrány s vysokou afinitou (16). Po navázání LfcinB zvyšuje propustnost buněčné membrány, čímž vyvolává baktericidní účinek (17). Studie v jiných biologických systémech rovněž odhalují antimykotické, antiparazitární, antivirové, protinádorové a imunomodulační účinky zprostředkované LfcinB (17-19), podobně jako bLf. Vzhledem k jejich strukturní podobnosti tato zjištění naznačují, že za tyto společné účinky může s největší pravděpodobností základní hydrofobní N-konec bLf (který obsahuje zbytky LfcinB) (20).

Tento přehled se zaměří na silné antikatabolické a protizánětlivé účinky LfcinB jak v kloubní chrupavce, tak v IVD, které zdůrazňují jeho potenciál jako terapeutického prostředku pro OA a DDD v budoucnosti.

Laktoferricin v kloubní chrupavce

Homeostáza chrupavky je udržována jemnou rovnováhou mezi katabolickými a anabolickými cestami. Pokud je tato rovnováha narušena, katabolické dráhy často převažují a vyvolávají degeneraci chrupavky, která se klinicky projevuje jako OA. Účinek LfcinB na katabolické dráhy spojené s degradací chrupavky poprvé zkoumali Yan et al (21). V jejich studii byla lidská kloubní chrupavka a synovie kultivována s IL-1β a fibroblastovým růstovým faktorem 2 (FGF-2) (dvě molekuly, o nichž je známo, že podporují katabolismus v kloubní chrupavce) s LfcinB nebo bez něj. Prokázali, že LfcinB účinně inhibuje katabolické účinky IL-1β i FGF-2. Zejména u lidských kloubních chondrocytů a synoviálních fibroblastů ošetřených IL-1β a FGF-2 byla v přítomnosti LfcinB snížena exprese enzymů degradujících matrix (tj. MMP-1, MMP-3 a MMP-13) a ADAMTS (tj. ADAMTS4 a ADAMTS5) na úrovni mRNA i proteinu. Toto zjištění je významné, protože bylo prokázáno, že MMP a ADAMTS přispívají k degradaci chrupavky (22) a hledání způsobů, jak snížit jejich aktivitu, bylo předmětem mnoha studií (23, 24).

Yan a kolegové také objasnili, že LfcinB může zasahovat do katabolických aktivit FGF-2 (známého také jako základní FGF) tím, že se potenciálně váže na heparan sulfátové proteoglykany (HSPG), jako je syndekan 4 (21). Syndekan 4 usnadňuje vazbu FGF-2 na receptor FGF na povrchu buněk. Schopnost LfcinB vázat se na syndekan byla popsána již dříve. Mader a spol. (25) zjistili, že LfcinB se váže se syndekanem a brání vazbě FGF-2 a vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VGEF) v endoteliálních buňkách lidské a myší pupečníkové žíly. Předpokládá se, že podobný mechanismus je přítomen i v buňkách kloubní chrupavky (21). LfcinB kompetitivně váže syndekan a brání vazbě FGF-2 na jeho receptor v kloubních buňkách, čímž zabraňuje jeho následným katabolickým a/nebo antianabolickým signálním kaskádám (21).

Společně s potlačením katabolických mediátorů inhibuje LfcinB také zánětlivé mediátory v kloubní chrupavce (21). V kloubní chrupavce LfcinB snížil expresi několika prozánětlivých genů, jako je IL-6 a toll-like receptor 2 (TLR-2). IL-6 může autokrinními a parakrinními mechanismy podněcovat degeneraci chrupavky a TLR-2 podněcuje vrozenou imunitní odpověď a zánět v kloubech s OA (26, 27). LfcinB navíc také reguloval protizánětlivé cytokiny, včetně IL-4 a IL-10 (21). Současnou modulací prozánětlivých a protizánětlivých aktivit způsobil LfcinB celkové snížení zánětu u OA.

V navazující studii Yan et al (28) dále charakterizovali signální dráhy využívané LfcinB a objevili další protikatabolický mediátor regulovaný v přítomnosti LfcinB (28), tkáňový inhibitor metaloproteinázy 3 (TIMP-3). Toto zjištění je významné v tom, že TIMP-3 je na rozdíl od ostatních členů rodiny TIMP (TIMP-1-4) silným inhibitorem s relevantním substrátovým spektrem v biologii chrupavky, včetně MT-MMP, ADAMTS4, ADAMTS5 a konvertázy tumor nekrotizujícího faktoru (29, 30). Vzhledem k tomu, že TIMP-3 je jediným endogenním inhibitorem ADAMTS (31), může to vysvětlovat, proč byl LfcinB schopen blokovat depleci PG působením IL-1β a FGF-2 ex vivo (19).

Ačkoli mnoho následných signálních drah zprostředkovaných LfcinB zůstává do značné míry neznámých, nedávné studie začaly odhalovat specifické kaskády stimulované LfcinB v lidské kloubní chrupavce. Farmakologickou inhibicí drah ERK, Akt a p38 Yan et al. (28) zjistili, že dráha ERK-1/2 zprostředkovává většinu aspektů účinků LfcinB v kloubních chondrocytech. Mechanistické studie transkripce TIMP-3 indukované LfcinB dále odhalily zásadní roli transkripčního faktoru Sp1 (32, 33). Sp1 patří k základnímu transkripčnímu aparátu při indukci TIMP-3, protože vyřazení Sp1 ruší expresi TIMP-3 indukovanou LfcinB (32). Zajímavé je, že Sp1 byl také kritický pro produkci TIMP-3 zprostředkovanou TGF-β (33), což naznačuje, že tento transkripční program může být aktivován různými signálními vstupy.

V dosud nepublikované studii Yan et al. dále prokázali, že protizánětlivý cytokin IL-11 byl dramaticky regulován LfcinB. Toto zvýšení IL-11 bylo důsledkem aktivace dráhy ERK-1/2, která následně aktivovala heterodimer c-Fos/JunD k zahájení transkripce. Indukovaný IL-11 pak stimuloval protizánětlivé i antikatabolické kaskády prostřednictvím indukce TIMP-1 způsobem závislým na Stat3.

Na základě těchto studií předpokládáme, že LfcinB podporuje protizánětlivé a antikatabolické aktivity prostřednictvím tří mechanismů (obr. 1): (i) kompetitivní vazba LfcinB na HSPG, čímž se zabrání účinné signalizaci IL-1 a FGF-2; (ii) indukce TIMP-3 k omezení endogenních proteolytických aktivit; a (iii) indukce ochranných cytokinů, zejména IL-11, které podporují protizánětlivost a antikatabolismus. Ačkoli tyto studie poskytly základ pro pochopení úlohy LfcinB v kloubní chrupavce, je třeba dalších studií k rozkrytí přesných drah a cílových genů regulovaných LfcinB.

Laktoferricin v buňkách IVD

Další oblastí, kde se LfcinB ukázal jako velmi slibný potenciální terapeutický prostředek, byla degenerace nucleus pulposus (NP) IVD. Podobně jako u kloubní chrupavky závisí udržování homeostázy tkáně NP na rovnováze mezi anabolickými a katabolickými procesy. Pokud je tato rovnováha narušena, dochází k degeneraci IVD, která může u pacienta vyústit v chronickou bolest zad.

Kim et al. (34) zkoumali účinky LfcinB na IVD hovězí i lidské tkáně. Prokázali, že přidání LfcinB do kultury buněk NP vedlo ke zvýšení syntézy PG. Jedním z mechanismů, kterým LfcinB zvýšil syntézu PG, byla regulace SOX-9. SOX-9 je klíčový transkripční faktor, u kterého bylo prokázáno, že zvyšuje expresi agrekanu a kolagenu typu II v buňkách NP skotu (35, 36). Buňky kultivované s LfcinB mají téměř 2,5-3,0krát vyšší koncentrace SOX-9 v závislosti na dávce LfcinB ve srovnání s buňkami bez LfcinB, což prokazuje jeho schopnost podporovat anabolické dráhy ve tkáni NP skotu (34). Kromě podpory SOX-9 existuje důkaz o potlačení klíčových enzymů degradujících chrupavku, včetně MMP-1, MMP-13 a ADAMTS5. Toto potlačení bylo doplněno podporou více TIMP včetně TIMP-1, TIMP-2 a TIMP-3, což dále potvrzuje antikatabolickou roli LfcinB (34). Nakonec byly objasněny signální dráhy, kterými LfcinB uplatňuje své anabolické účinky. Byla hodnocena aktivace podskupin mitogenem aktivované proteinkinázy (MAPK) (ERK, p38 a JNK), přičemž přítomnost LfcinB aktivuje pouze dráhy ERK a p38, zatímco dráha JNK nebyla aktivována v žádném časovém bodě (34). Míra zapojení jednotlivých aktivovaných drah byla hodnocena pomocí specifických farmakologických inhibitorů. Inhibice dráhy p38 vede k významnému snížení indukce genu pro agrekan až pod úroveň kontrolní skupiny. Inhibice dráhy ERK vedla také k poklesu indukce agrekanu, ale ne v takovém rozsahu jako inhibice p38 (34).

Ellman et al (37) dále zkoumali signální dráhu, kterou působí LfcinB, a identifikovali synergický vztah mezi LfcinB a dalším anabolickým mediátorem: kostním morfogenetickým proteinem 7 (BMP-7). V jejich studii vedlo ošetření hovězích IVD buněk kombinací LfcinB a BMP-7 k větší akumulaci a syntéze PG a k indukci genu pro agrekan. Navrhli, že synergický mechanismus je výsledkem společné aktivace SMAD-1/5/8 jak BMP-7, tak LfcinB (38, 39). LfcinB také downreguloval SMAD-6 (silný inhibitor SMAD-1/5/8) i Noggin (inhibitor BMP-7) (37). Snížení těchto inhibičních faktorů umožňuje, aby LfcinB eliminoval negativní zpětnou vazbu na BMP-7 a umožnil maximální anabolický přínos BMP-7. Autoři dospěli k závěru, že tato kombinace by mohla být potenciálně klinicky využita v prevenci a léčbě degenerace IVD (37).

Další pohled na protizánětlivou povahu LfcinB v IVD poskytuje navazující studie Kima a spol (40). Tato studie se zaměřila především na interakci LfcinB s mediátory zánětu IL-1 a endotoxinem lipopolysacharidem (LPS). Jak IL-1, tak LPS se ukázaly jako silné zánětlivé mediátory vedoucí k degeneraci buněk IVD (41, 42). Kim a spol. (40) svými experimenty prokázali, že LfcinB po přidání do kultur IVD skotu vyvolává zvýšení tvorby pericelulární matrix. Tento anabolický účinek byl tak silný, že přídavek LfcinB zachránil potlačenou tvorbu pericelulární matrix v přítomnosti IL-1 a LPS. Přídavek LfcinB rovněž potlačil IL-1 a LPS zprostředkovanou produkci MMP-1, MMP-3, MMP-13 a ADAMTS-5, u nichž bylo prokázáno, že se podílejí na degeneraci disku. A konečně, přidání LfcinB do kultur IVD obsahujících IL-1 a LPS vedlo k útlumu regulace TLR-2 a TLR-4. TLR-2 a TLR-4 mají důležité regulační funkce v zánětlivých a oxidačních drahách vedoucích k degeneraci IVD (27, 43). Schopnost potlačit expresi TLR i dalších katabolických mediátorů ukazuje na silný antikatabolický potenciál LfcinB v IVD.

Kim et al. (40) také zkoumali terapeutický potenciál LfcinB zkoumáním ex vivo orgánových kultur IVD novozélandských bílých králíků a myší. Před kultivací byly disky injikovány en bloc s LfcinB (200 μg na králičí disk a 100 μg na myší disk). Disky s LfcinB a kontrolní disky bez injekcí LfcinB byly kultivovány v médiu obsahujícím IL-1, LPS nebo žádný z nich. U disků bez injekce LfcinB došlo k výraznému vyčerpání PG v přítomnosti IL-1 a LPS a ke snížení buněčnosti pericelulární matrix. Disky s injekcí LfcinB vykazovaly zeslabení účinku IL-1 a LPS. Toto zjištění je významné pro prokázání potenciálu LfcinB jako terapeutické látky proti katabolickým aktivátorům IL-1 a LPS v IVD.

Závěr

Laktoferricin je molekula, u které bylo prokázáno, že má mnoho funkcí v různých biologických systémech. Její úloha v muskuloskeletálním systému se teprve začíná objasňovat. Zejména protizánětlivé a antikatabolické vlastnosti LfcinB z něj činí atraktivní možnost v léčbě DDD a degenerace IVD. Oba tyto patologické procesy jsou důsledkem silných zánětlivých a katabolických mediátorů, které posouvají homeostatickou rovnováhu směrem ke katabolismu. K objasnění přesných mechanismů a drah aktivovaných LfcinB jsou zapotřebí další studie, nicméně potenciál LfcinB jako terapeutické možnosti u OA a DDD je velmi slibný.

1. Buckwalter JA, Saltzman C, Brown T. Dopad osteoartrózy: důsledky pro výzkum. Clin Orthop Relat Res 2004; 427: S6-15. Hledání v Google Scholar

2. Buckwalter JA. Stárnutí a degenerace lidské meziobratlové ploténky. Spine 1995; 20: 1307-14. Vyhledávání v Google Scholar

3. Andersson GB. Epidemiologické rysy chronické bolesti dolní části zad. Lancet 1999; 354: 581-5. Search in Google Scholar

4. Freemont TJ, LeMaitre C, Watkins A, Hoyland JA. Degenerace meziobratlových plotének: současné znalosti buněčných a molekulárních dějů a důsledky pro nové terapie. Expert Rev Mol Med 2001; 3: 1-10. Hledání v Google Scholar

5. Goldring MB. Úloha chondrocytů při osteoartróze. Arthritis Rheum 2000; 43: 1916-26. Search in Google Scholar

6. Masuda K, Imai Y, Okuma M, Muehleman C, Nakagawa K, Akeda K, Thonar E, Andersson G, An HS. Injekce osteogenního proteinu-1 do degenerovaného disku vyvolává obnovení výšky disku a strukturální změny na modelu králičí anulární punkce. Spine 2006; 31: 742-54. Hledání v Google Scholar

7. Im HJ, Li X, Muddasani P, Kim GH, Davis F, Rangan J, Forsyth CB, Ellman M, Thonar EJ. Basic fibroblast growth factor accelerates matrix degradation via a neuro-endocrine pathway in human adult articular chondrocytes. J Cell Physiol 2007; 215; 452-63. Hledání v Google Scholar

8. Im HJ, Muddasani P, Natarajan V, Schmid TM, Block JA, Davis F, van Wijnen AJ, Loeser RF. Základní fibroblastový růstový faktor stimuluje matrixovou metaloproteinázu-13 prostřednictvím molekulární křížové vazby mezi cestami mitogenem aktivovaných proteinkináz a proteinkinázou Cdelta v lidských dospělých kloubních chondrocytech. J Biol Chem 2007; 282: 11110-21. Hledání v Google Scholar

9. Muddasani P, Norman JC, Ellman M, van Wijnen AJ, Im HJ. Basic fibroblast growth factor activates the MAPK and NFkappaB pathways that converge on Elk-1 to control the production of matrix metalloproteinase-13 by human adult articular chondrocytes. J Biol Chem 2007; 282: 31409-21. Hledání v Google Scholar

10. Sorensen M, Sorensen SPL. Proteiny v syrovátce. C R Trav Lab Carlsberg 1939; 23: 55-99. Hledání v Google Scholar

11. Bennett RM, Kokocinski T. Obsah laktoferinu v buňkách periferní krve. Br J Haematol 1978; 39: 509-21. Hledání v Google Scholar

12. Ward PP, Paz E, Conneely OM. Multifunkční role laktoferinu: kritický přehled. Cell Mol Life Sci 2005; 62: 2540-8. Hledání v Google Scholar

13. Hayashida K, Kaneko T, Takeuchi T, Shimizu H, Ando K, Harada E. Perorální podávání laktoferinu inhibuje zánět a nocicepci u potkaní adjuvantem indukované artritidy. J Vet Med Sci 2004; 66: 149-54. Hledání v Google Scholar

14. Guillen C, McInnes IB, Vaughan D, Speekenbrink AB, Brock JH. Účinky lokálního podávání laktoferinu na zánět u myší autoimunitní a infekční artritidy. Arthritis Rheum 2000; 43: 2073-80. Hledání v Google Scholar

15. Kuwata H, Yip TT, Yip CL, Tomita M, Hutchens TW. Přímá detekce a kvantitativní stanovení bovinního laktoferricinu a fragmentů laktoferinu v lidském žaludečním obsahu pomocí afinitní hmotnostní spektrometrie. Adv Exp Med Biol 1998; 443: 23-32. Hledání v Google Scholar

16. Hwang PM, Zhou N, Shan X, Arrowsmith CH, Vogel HJ. Three-dimensional solution structure of lactoferricin B, an antimicrobial peptide derived from bovine lactoferrin [Trojrozměrná struktura roztoku laktoferinu B, antimikrobiálního peptidu odvozeného z hovězího laktoferinu]. Biochemistry 1998; 37: 4288-98. Hledání v Google Scholar

17. Gifford JL, Hunter HN, Vogel HJ. Lactoferricin: peptid odvozený od laktoferinu s antimikrobiálními, antivirovými, protinádorovými a imunologickými vlastnostmi. Cell Mol Life Sci 2005; 62: 2588-98. Hledání v Google Scholar

18. Mader JS, Richardson A, Salsman J, Top D, de Antueno R, Duncan R, Hoskin DW. Bovinní laktoferricin způsobuje apoptózu u buněk Jurkat T-leukemie postupnou permeabilizací buněčné membrány a cílením na mitochondrie. Exp Cell Res 2007; 313: 2634-50. Hledání v Google Scholar

19. Zhang JX, Zhang SF, Wang TD, Guo XJ, Hu RL. Exprese antibakteriálních peptidových genů v mléčné žláze k inhibici bakteriálních patogenů způsobujících mastitidu. J Dairy Sci 2007; 90: 5218-25. Hledání v Google Scholar

20. Kang JH, Lee MK, Kim KL, Hahm KS. Structure-biological activity relationships of 11-residue highly basic peptide segment of bovine lactoferrin. Int J Pept Protein Res 1996; 48: 357-63. Hledání v Google Scholar

21. Yan D, Chen D, Shen J, Xiao G, van Wijnen AJ, Im HJ. Bovinní laktoferricin je protizánětlivý a antikatabolický v lidské kloubní chrupavce a synovii. J Cell Physiol 2013; 228: 447-56. Hledání v Google Scholar

22. van den Berg WB. Osteoartróza rok 2010 v přehledu: patomechanismy. Osteoarthritis Cartilage 2011; 19: 338-41. Hledání v Google Scholar

23. Li NG, Shi ZH, Tang YP, Wang ZJ, Song SL, Qian LH, Qian DW, Duan JA. Nová naděje pro léčbu osteoartrózy prostřednictvím selektivní inhibice MMP-13. Curr Med Chem 2011; 18: 977-1001. Hledání v Google Scholar

24. De Rienzo F, Saxena P, Filomia F, Caselli G, Colace F, Stasi L, Giordani A, Menziani MC. Pokrok v identifikaci nových inhibitorů agrekanázy. Curr Med Chem 2009; 16: 2395-415. Hledání v Google Scholar

25. Mader JS, Smyth D, Marshall J, Hoskin DW. Bovinní laktoferricin inhibuje angiogenezi vyvolanou základním fibroblastovým růstovým faktorem a vaskulárním endoteliálním růstovým faktorem165 tím, že soutěží o vazebná místa podobná heparinu na endoteliálních buňkách. Am J Pathol 2006; 169: 1753-66. Hledání v Google Scholar

26. Su SL, Tsai CD, Lee CH, Salter DM, Lee HS. Exprese a regulace Toll-like receptoru 2 pomocí IL-1beta a fragmentů fibronektinu v lidských kloubních chondrocytech. Osteoarthritis Cartilage 2005; 13: 879-86. Hledání v Google Scholar

27. Kim HA, Cho ML, Choi HY, Yoon CS, Jhun JY, Oh HJ, Kim HY. Katabolická dráha zprostředkovaná toll-like receptory v lidských osteoartritických chondrocytech. Arthritis Rheum 2006; 54: 2152-63. Hledání v Google Scholar

28. Yan D, Chen D, Hawse JR, van Wijnen AJ, Im HJ. Bovinní laktoferricin indukuje TIMP-3 prostřednictvím osy ERK1/2-Sp1 v lidských kloubních chondrocytech. Gene 2013; 517: 12-8. Hledání v Google Scholar

29. Apte SS, Olsen BR, Murphy G. Genová struktura tkáňového inhibitoru metaloproteináz (TIMP)-3 a jeho inhibiční aktivity definují odlišnou rodinu genů TIMP. J Biol Chem 1995; 270; 14313-8. Hledání v Google Scholar

30. Knauper V, Will H, López-Otin C, Smith B, Atkinson SJ, Stanton H, Hembry RM, Murphy G. Cellular mechanisms for human procollagenase-3 (MMP-13) activation. Důkaz, že MT1-MMP (MMP-14) a gelatináza a (MMP-2) jsou schopny vytvářet aktivní enzym. J Biol Chem 1996; 271: 17124-31. Hledání v Google Scholar

31. Kashiwagi M, Tortorella M, Nagase H, Brew K. TIMP-3 je silný inhibitor agrekanázy 1 (ADAM-TS4) a agrekanázy 2 (ADAM-TS5). J Biol Chem 2001; 276: 12501-4. Hledání v Google Scholar

32. Wick M, Härönen R, Mumberg D, Bürger C, Olsen BR, Budarf ML, Apte SS, Müller R. Structure of the human TIMP-3 gene and its cell cycle-regulated promoter. Biochem J 1995; 311: 549-54. Hledání v Google Scholar

33. Qureshi HY, Sylvester J, El Mabrouk M, Zafarullah M. TGF-beta indukovaná exprese genu tissue inhibitor of metalloproteinases-3 v chondrocytech je zprostředkována cestou extracelulárním signálem regulované kinázy a transkripčním faktorem Sp1. J Cell Physiol 2005; 203: 345-52. Hledání v Google Scholar

34. Kim JS, Ellman MB, An HS, Yan D, van Wijnen AJ, Murphy G, Hoskin DW, Im HJ. Lactoferricin zprostředkovává anabolické a antikatabolické účinky v meziobratlové ploténce. J Cell Physiol 2012; 227: 1512-20. Hledání v Google Scholar

35. Sekiya I, Tsuji K, Koopman P, Watanabe H, Yamada Y, Shinomiya K, Nifuji A, Noda M. SOX-9 zvyšuje promotorovou/enhancerovou aktivitu genu aggrecan a je regulován kyselinou retinovou v buněčné linii odvozené od chrupavky TC6. J Biol Chem 2000; 275: 10738-44. Hledání v Google Scholar

36. Zhang Y, An HS, Thonar EJ, Chubinskaya S, He TC, Phillips FM. Srovnávací účinky kostních morfogenetických proteinů a nadměrné exprese SOX-9 na metabolismus extracelulární matrix buněk hovězího nucleus pulposus. Spine (Phila Pa 1976) 2006; 31: 2173-9. Hledání v Google Scholar

37. Ellman MB, Kim J, An HS, Chen D, Kc R, Li X, Xiao G, Yan D, Suh J, van Wjnen AJ, Wang JH, Kim SG, Im HJ. Lactoferricin posiluje anabolické dráhy stimulované BMP7 v buňkách meziobratlové ploténky. Gene 2013; 524: 282-91. Hledání v Google Scholar

38. Flechtenmacher J, Huch K, Thonar EJ, Mollenhauer JA, Davies SR, Schmid TM, Puhl W, Sampath TK, Aydelotte MB, Kuettner KE. Rekombinantní lidský osteogenní protein 1 je silným stimulátorem syntézy proteoglykanů a kolagenů chrupavky lidskými kloubními chondrocyty. Arthritis Rheum 1996; 39: 1896-904. Hledání v Google Scholar

39. Sampath TK, Maliakal JC, Hauschka PV, Jones WK, Sasak H, Tucker RF, White KH, Coughlin JE, Tucker MM, Pang RH. Rekombinantní lidský osteogenní protein-1 (hOP-1) indukuje tvorbu nové kosti in vivo se specifickou aktivitou srovnatelnou s přirozeným hovězím osteogenním proteinem a stimuluje proliferaci a diferenciaci osteoblastů in vitro. J Biol Chem 1992; 267: 20352-62. Hledání v Google Scholar

40. Kim JS, Ellman MB, Yan D, An HS, Kc R, Li X, Chen D, Xiao G, Cs-Zabo G, Hoskin DW, Buechter DD, van Wijnen AJ, Im HJ. Lactoferricin zprostředkovává protizánětlivé a antikatabolické účinky prostřednictvím inhibice aktivity IL-1 a LPS v meziobratlové ploténce. J Cell Physiol 2013; 228: 1884-96. Hledání v Google Scholar

41. Millward-Sadler SJ, Costello PW, Freemont AJ, Hoyland JA. Regulace exprese katabolických genů v normálních a degenerovaných buňkách lidské meziobratlové ploténky: důsledky pro patogenezi degenerace meziobratlové ploténky. Arthritis Res Ther 2009; 11: R65. Hledání v Google Scholar

42. Liu MH, Sun JS, Tsai SW, Sheu SY, Chen MH. Icariin chrání myší chondrocyty před zánětlivými reakcemi vyvolanými lipopolysacharidem a degradací extracelulární matrix. Nutr Res 2010; 30: 57-65. Hledání v Google Scholar

43. Campo GM, Avenoso A, Nastasi G, Micali A, Prestipino V, Vaccaro M, D’Ascola A, Calatroni A, Campo S. Hyaluronan snižuje zánět u experimentální artritidy modulací exprese TLR-2 a TLR-4 v chrupavce. Biochim Biophys Acta 2011; 1812: 1170-81. Search in Google Scholar