Autoradiografie

Autoradiography

Autoradiografie Southern Blotu

Autoradiografie je třída technik, při nichž se z polohy radioizotopově značeného biologického materiálu vytváří autoradiogram („vlastní snímek“). Radioizotopy jako 14C, 32P, 35S emitují záření, které exponuje fotografický nebo rentgenový film. Substituce 32P do páteře DNA nebo 35S do aminokyselin obsahujících síru umožňuje detekovat označené molekuly.

Southern Blot filtr je umístěn uvnitř světlovzdorné kazetové krabičky (vlevo) a překryt listem rentgenového filmu. Kazeta se uzavře a ponechá se několik hodin až několik dní. Radioizotopem značená DNA exponuje film, na kterém se po vyvolání zobrazí vzor černých pruhů, které označují pozice značené DNA v blotu. Vyrovnávací značky ve třech ze čtyř rohů jsou provedeny speciálním inkoustem, který rovněž exponuje film. Skvrnu lze zarovnat s filmem pomocí tří indexových značek (u te značek je možné pouze jedno zarovnání). Při některých pokusech lze zarovnání použít k nalezení určitého pruhu DNA na skvrně a jeho vystřižení, aby bylo možné získat DNA pro další pokusy.

Napsat komentář