huFcγRIII
huFcγRIII (CD16) váže IgG1 a IgG3 s Ka ∼ 4 × 106 M-1 (Kurlander a Batker, 1982) a je exprimován na makrofázích, přirozených zabíječích (NK), neutrofilech, eozinofilech a některých T-lymfocytech (Anderson, 1989). Mr huFcγRIII se pohybuje mezi 50 a 70 K (Fleit a kol., 1982). Imunoprecipitační studie lyzátů NK a neutrofilních buněk s použitím mAb specifické pro huFcγRIII a následnou deglykosylací a SDS-PAGE odhalily u obou typů buněk jádrové proteiny s různými hodnotami Mr (Lanier et al., 1988). Následné experimenty s klonováním cDNA prokázaly, že NK buňky přepisují mRNA odlišnou od mRNA neutrofilů (Scallon et al., 1989; Ueda et al., 1989; Ravetch a Perussia, 1989; Edberg et al., 1989; Selvaraj et al., 1989). Nejméně dva geny tedy kódují huFCγRIII: huFcγRIII-1 na neutrofilech a huFcγRIII-2 na NK buňkách a makrofázích.
huFcγRIII-1 je na rozdíl od všech ostatních FcγR ukotven na membráně neutrofilních buněk prostřednictvím vazby GPI a může být uvolněn z buněčné membrány fosfoinositol-specifickou fosfolipázou C (Selvaraj et al., 1989; Edberg et al., 1989; Ravetch a Perussia, 1989; Scallon et al., 1989; Ueda et al., 1989). Stimulace neutrofilů chemotaktickým peptidem formyl-Met-Leu-Phe vedla k uvolnění huFcγRIII-1 z membrány neutrofilů (Huizinga et al., 1988). Není jasné, zda k tomu došlo v důsledku proteolytického štěpení nebo aktivace fosfolipázy C. Změna jedné aminokyseliny v doméně GPI vazby huFcγRIII-1 vede k ukotvení proteinu tansmembránovou doménou s krátkým cytoplazmatickým ocáskem (Kurosaki a Ravetch, 1989; Lanier a kol., 1989a).
Stejně jako u huFcγRII existují pro huFcγRIII-1 dva alotypy (NA1 a NA2). Tyto alotypové rozdíly mohou způsobit autoimunitní neutropenii u kojenců (Lalezari et al., 1986). Po deglykosylaci a následné SDS-PAGE byly rozlišeny dvě formy receptoru (19 a 21 kDa) na neutrofilech (Edberg et al., 1989). Vzor exprese typů receptorů 19 a 21 kDa koreloval se vzorem exprese alotypových markerů NA1 a NA2. Rozlišení těchto alotypů (NA1 a NA2) bylo možné pomocí mAbs CLB-GRAN11, respektive GRM1 (Huizinga et al., 1990a).
Předpokládá se, že většina funkcí neutrofilů zprostředkovaných FcγR je přenášena huFcγRII, přestože míst huFcγRIII-1 je mnohem více, 135 000 míst na neutrofil (Fleit et al., 1982), než míst huFcγRII, ∼10 000 na neutrofil (Anderson, 1989). ADCC kuřecích erytrocytů potažených heteroprotilátkami složenými z Fab fragmentů anti-CE a antihuFcγR mAbs byla na neutrofilech zprostředkována jak huFcγRII, tak huFcγRIII (Graziano et al., 1989a). Neutrofily však nedokázaly zabít hybridomovou buněčnou linii antihuFcγRIII. Nedávná práce prokázala, že huFcγRIII-1 může po zesíťování vyvolat uvolnění hydroláz, ale ne respirační výbuch (Huizinga et al., 1990b). To může vysvětlovat pozorovanou lýzu CE, ale ne hybridomových buněk zprostředkovanou prostřednictvím huFcγRIII-1.
Vysoká hustota huFcγRIII-1 na neutrofilech může sloužit k soustředění imunitních komplexů na povrchu buněk, kde mohou interagovat s huFcγRII a spouštět je. Ve skutečnosti studie (Looney et al., 1986b; Tetteroo et al., 1987) naznačují, že především huFcγRIII se podílí na adherenci neutrofilů k erytrocytům pokrytým IgG. Stejně tak huFcγRIII-1 byl nezbytný pro vazbu malých imunitních komplexů na neutrofily, zatímco huFcγRII tuto vazbu zvyšoval jen slabě (Huizinga et al., 1989a). Přesto se tato zásadní vazebná role huFcγRIII-1 nevztahovala na velké imunitní komplexy a pacienti s paroxyzmální noční hematurií, u nichž byla hladina huFcγRIII-1 pouze 10 % normální, měli normální metabolickou odpověď na IgG-latex (Huizinga et al., 1989a). Byla nalezena pacientka se systémovým lupus erythematodes (SLE), která neexprimovala huFcγRIII-1 na svých neutrofilech v důsledku pravděpodobné delece genu huFcγRIII-1 (Clark et al., 1990). Neutrofily této pacientky však měly sníženou schopnost rozetovat erytrocyty obalené IgG, jak naznačovaly dřívější studie funkce neutrofilů (Looney et al., 1986b; Tetteroo et al., 1987). Tento pacient však nevykazoval žádnou neobvyklou náchylnost k bakteriálním infekcím a hladiny ostatních proteinů vázaných na GPI a huFcγRII byly normální. Osm dalších pacientů s diagnózou SLE mělo normální hladiny huFcγRIII-1. Značné procento (25 %) neutrofilů u mužů infikovaných HIV bylo negativní na expresi huFcγRIII-1, ale hladiny ostatních proteinů vázaných na GPI a huFcγRII byly normální (Boros et al., 1990b). Subpopulace negativní na huFcγRIII byla větší u pacientů se syndromem autoimunitní nedostatečnosti (AIDS) a u HIV infikovaných intravenózních uživatelů drog ve srovnání s HIV infikovanými homosexuály a neinfikovanými kontrolními muži. Mechanismus odpovědný za ztrátu huFcγRIII-1 a fyziologické důsledky této změněné exprese nebyly dosud zkoumány. Uvádí se, že hladiny huFcγRIII v séru se v průběhu AIDS mění, s počátečním nárůstem a následným poklesem sérových hladin huFcγRIII v terminálních stadiích onemocnění (Khayat et al.,
huFcγRIII-2 má Mr jádra proteinu o něco větší než huFcγRIII-1 (∼ 24K oproti ∼ 20K) a je to membránový glykoprotein typu I s jednou transmembránovou doménou a cytoplazmatickou doménou (Unkeless, 1989a). huFcγRIII-2 je forma huFcγRIII, která se nachází na makrofázích a NK buňkách. Transmembránová doména je vysoce homologní s doménou moFcγRIIα a α-řetězcem raFc∈RI, včetně identického osmiaminokyselinového úseku.
huFcγRIII-2 na NK buňkách zprostředkovává ADCC po zesíťování (Werfel et al., 1989). Zesíťování receptoru imunitním komplexem také indukuje transkripci receptoru pro interleukin-2, IFN-γ a TNF-α, které aktivují aktivitu NK buněk (Anegon et al., 1988). Proto kromě toho, že působí jako spouštěč ADCC na buňkách NK, aktivace huFcγRIII-2 na buňkách NK také potencuje přirozenou zabíječskou aktivitu buněk NK nezávislou na Ig. Schopnost protilátek anti-LFA-1 (CD11a) inhibovat huFcγRIII-2 zprostředkovanou ADCC buňkami NK naznačuje zapojení tohoto adhezivního receptoru do spojení efektorové a cílové buňky během NK zprostředkované ADCC (Werfel et al., 1989). Podobně u monocytů, ale ne u lymfocytů, blokování LFA-1 inhibovalo ADCC, která je zprostředkována zkřížením huFcγRs (Graziano et al., 1989b).
Malé podskupiny NK buněk exprimují málo nebo vůbec huFcγRIII-2 (Lanier et al., 1986). Úroveň exprese huFcγRIII může znamenat různá vývojová stadia v linii NK buněk. NK buňky s nízkou úrovní exprese nebo bez exprese huFcγRIII-2 se v odpovědi na rIL-2 intenzivněji množí (Nagler et al., 1989). Nejzralejší stadium, založené na nízké proliferační schopnosti, vysokém množství v krvi a vysokém cyotoxickém potenciálu, tvoří NK buňky exprimující hojně huFcγRIII-2.
Řada studií prokázala, že huFcγRIII-2 na makrofázích ve slezině a na Kupfferových buňkách je primárním receptorem odpovědným za clearance velkých imunitních komplexů. U šimpanzů inhibovala mAb 3G8 proti huFcγRIII in vivo clearance autologních erytrocytů potažených protilátkou namířenou proti antigenu minoritní krevní skupiny (Clarkson et al., 1986b). mAb 3G8 byla testována jako potenciální terapeutický prostředek pro jedince s imunitní trombocytární purpurou, onemocněním, při kterém pacienti vylučují vysoké hladiny protilátek proti krevním destičkám (Clarkson et al., 1986a). Léčba jednoho pacienta vedla k dramatickému zvýšení hladin krevních destiček, které se během 2 týdnů vrátily na normální hodnoty. Bohužel druhá léčba přinesla mnohem méně dramatickou odpověď. Senzibilizace na myší mAb může snižovat její účinnost.
hufcγRIII na kultivovaných monocytech je biochemicky nerozlišitelná od NK buněk (Klaassen et al., 1990). Zprávy se rozcházejí v tom, zda je huFc7RIII spouštěcí molekulou pro ADCC makrofágy. Přidání mAb proti huFcγRIII, CLB-FcR-GRAN1, nesnížilo lytickou aktivitu kultivovaných monocytů proti erytrocytům senzibilizovaným 4 × 104 molekulami na erytrocyt různých izotypových variant přepínače (IgG1, IgG2a a IgG2b) myší mAb nebo stejného množství IgG3 z jiné myší hybridomové buněčné linie (Klaassen et al., 1990). Byla přijata opatření, aby bylo jisté, že pokusy byly prováděny pod maximální lytickou aktivitou jiného huFcγR na kultivovaných monocytech, aby bylo možné zjistit inhibici mAb CLB-FcR-GRAN1. Nicméně peritoneální makrofágy, dokonce i čerstvé monocyty, byly zjevně schopny usmrtit hybridomovou buněčnou linii s anti-FcγRIII (HC 3G8) (Graziano et al., 1989b). To byl první důkaz, že huFcγRIII-2 může být funkčně detekovatelný na čerstvých monocytech. Rozdíl v usmrcující schopnosti může být způsoben různými cílovými buňkami a mAbs použitými v jednotlivých studiích.
FcγRs může zhoršit infekci HIV buněk nesoucích FcγR v přítomnosti protilátek proti HIV. HuFcγRIII-2 exprimovaná na makrofázích zprostředkovala na protilátkách závislé zesílení HIV infekce makrofágů (Homsy et al., 1989). Protilátky namířené proti huFcγRIII-2 tento účinek blokovaly, zatímco protilátky proti huFcγRI nebo proti huFcγRII nikoli. Pozorování, že infekce HIV-1 může probíhat nezávisle na interakci CD4-gp120, je posíleno pozorováním, že cytomegalovirem infikované fibroblasty, exprimující virově kódovaný FcγR, mohou být infikovány imunitními komplexy HIV-1 a tato infekce může být blokována agregáty IgG (McKeating et al., 1990).
.