Účel: V poslední době se ukázalo, že několik technik reverzní transkripce-PCR je užitečných pro detekci cirkulujících mikrometastáz. Tímto způsobem však nebylo možné detekovat intaktní buněčné shluky, které měly v pokusech na zvířatech prognostickou hodnotu. V této studii bylo provedeno hodnocení a modifikace komerční metody imunomagnetické separace buněk na bázi cytokeratinu pro detekci intaktních buněčných klastrů u pacientů s kolorektálním karcinomem.
Experimentální design: Bylo hodnoceno 32 pacientů s karcinomem tlustého střeva (6 bylo ve stadiu Dukes B, 13 ve stadiu C a 13 ve stadiu D) a 20 vzorků zdravých dárců. Imunomagnetická separace buněk byla provedena z buffy coat vzorků periferní krve (20 ml) pomocí soupravy Carcinoma Cell Enrichment Kit (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Německo), přičemž se zabránilo jakýmkoli filtračním krokům. Obohacená buněčná frakce byla cytocentrifugována a imunocytochemicky označena pomocí protilátky proti pancytokeratinu (MNF116; Dako).
Výsledky: Z 20 zdravých vzorků obsahovaly 2 vzorky jednu cytokeratin pozitivní buňku. Z 32 jednotlivých vzorků z maligních případů jich 24 vykazovalo cytokeratin-pozitivní buňky. U 22 z 24 pacientů byly zjištěny shluky nádorových buněk, dublety smíšených buněk (jedna cytokeratin-pozitivní a jedna negativní buňka) a shluky smíšených buněk. V šesti případech byly zjištěny cytokeratin-pozitivní dendritické buňky. Údaje z následného sledování ukazují, že chemoterapie nemůže zničit všechny cirkulující shluky nádorových buněk.
Závěry: Pomocí předložených metod jsme mohli detekovat cirkulující nádorové buňky a shluky buněk u pacientů s karcinomem tlustého střeva. Podobné buněčné struktury byly dříve popsány pouze u potkanů. Předložené údaje dokazují, že takové struktury jsou přítomny i u lidského kolorektálního karcinomu.