Chromatogram je v podstatě výstup z chromatografické operace. Je to elektronický soubor nebo tištěná kopie obsahující informace vytvořené během chromatografického běhu.
Existuje mnoho různých variant toho, co se na chromatogramu zobrazuje – v závislosti na nastaveních používaných v jednotlivých laboratořích a případných regulačních požadavcích. Jako příklad lze uvést minimum, které se zobrazuje na chromatografickém záznamu ze vzorku v procesu:
- Identifikace vzorku (Produkt, číslo šarže, číslo etapy)
- Informace o vzorku (hmotnost nebo koncentrace vzorku)
- Datum a čas provedení nástřiku
- Jméno nebo identifikace analytika
- Identifikace přístroje a název použité analytické metody
- Název a umístění nezpracovaných dat vygenerovaných během běhu
- Záznam grafu zobrazující generované píky a základní linii, známý jako stopa
- Tabulka výsledků (obsahující surová data a vypočtená data)
V dnešní době je generování tabulky výsledků do značné míry automatizovaný proces, ale ne vždy to bylo tak jednoduché….
Čtverečkovaný papír a nůžky
Dříve než se analýza dat a digitální integrace staly standardem – grafický papír a nůžky se nacházely na poličce každého analytika.
Záznamník grafů, propojený s detektorem, zaznamenával stopu přímo na čtverečkovaný papír nebo grafický papír pomocí inkoustového pera. Ze stopy se běžně používaly dvě metody pro vypracování výsledků:
Počítání čtverečků:
Analytik použil pravítko a pero, aby nakreslil nejlepší tvar píku (trojúhelník) a základní linii. Poté se spočítal počet čtverců v každém trojúhelníku. Tento počet se pak použil spolu s útlumem detektoru a vypočítalo se složení vzorku.
Rozstříhání a vážení:
Pro zaznamenané píky byla sestrojena základní linie. Poté byly píky vyříznuty a zváženy. Plocha píku je úměrná hmotnosti za předpokladu, že tloušťka a vlhkost papíru jsou rovnoměrné. Ke zvýšení přesnosti lze použít triky, jako je fotokopie stopy a zvětšení stopy.
Jak lze zobrazit, překrývající se píky a vzorky obsahující mnoho různých složek mohou analytikovi způsobit vážné problémy. Nyní počítače pomáhají chyby omezit.
Čtení chromatogramu
Ačkoli moderní přístrojové vybavení odstranilo většinu dohadů z dob papíru a nůžek, schopnost číst a interpretovat chromatogram je v dnešní době stejně důležitá.
Vždy je třeba zkontrolovat stopu, protože to bude první známka toho, zda se při chromatografii něco pokazilo. Mezi jednoduché kontroly patří:
- Vypadá základní linie v pořádku, plochá s nepříliš velkým šumem?
- Jsou tvary píků přijatelné? Není příliš velká asymetrie, jsou pěkné a ostré a odpovídají měřítku
- Je správný počet vrcholů? Jsou nějaké píky navíc nebo chybí?
- Jsou správně identifikovány píky referenčního a vnitřního standardu a retenční časy v pořádku?
Přestože jsou všechna data zaznamenána a výpočty provedeny za analytika, je jeho úkolem ujistit se, že nedošlo k chybám. Diskusi o analýze dat v moderních systémech najdete v tomto článku:
Automatizovaná analýza metrik přístrojů HPLC s otevřeným přístupem.