Na current in membrane blebs: implications for channel mobility and patch clamp recording

Když bylo při záznamu z enzymaticky disociovaných svalových vláken aplikováno sání na volné pipety patch clamp, vytvořily se v pipetách velké membránové bleby. Zahájili jsme studii těchto sáním vyvolaných blebů, protože iontové kanály v blebech by komplikovaly nebo případně znehodnocovaly měření hustoty membránového proudu pomocí volných patch clampů. Nízká laterální pohyblivost (Stühmer a Almers, 1982) a strmé gradienty Na kanálů na koncové destičce a šlaše (Caldwell et al., 1986) naznačují těsnou vazbu Na kanálů na cytoskeletální prvky a vedly nás k očekávání, že v blebech bude jen málo Na kanálů, pokud vůbec nějaké. Tvorba bleb způsobila zvýšení membránové kapacity, jak se očekávalo na základě zvětšení plochy membrány. Tvorba blebů také zvýšila Na proud, což naznačuje, že bleby obsahují Na kanály. Za předpokladu, že zvýšená kapacita a Na proud byly způsobeny přesunem lipidů a Na kanálů z membrány mimo pipetu, se očekávalo, že vyhození bleb z pipety vrátí kapacitu a Na proud na původní hodnoty. Kapacita se skutečně vrátila na původní hodnotu, ale proud Na byl nižší, než se očekávalo. Pokles Na proudu se vysvětluje přesunem Na kanálů z membrány záplaty do bleb. Normalizace Na proudu bleb a patch k jejich příslušným kapacitám ukázala, že bleb membrána má téměř 50% hustotu Na kanálů oproti normální povrchové membráně. Membrána bleb tedy není ani zbavena proteinů, ani skutečně reprezentativní pro normální povrchovou membránu, ze které vznikla. Je obohacena o membránové lipidy a je relativně chudá na proteiny. Lze vyvodit dva závěry: (ABSTRAKT ZKRÁCEN NA 250 SLOV)

.

Napsat komentář