H. hepaticus-driven inflammation alterters the intestinal mononuclear phagocyte compartment
グラム陰性菌Helicobacter hepaticus（Hh）は、マウス下部腸管の粘膜層に普通に見られる非侵襲性の生物である。 この細菌に感染した野生型動物は腸管免疫病理を発症せず、感染のキャリアーとして機能する。21 しかし、IL-10/IL-10R経路に遺伝子欠損を持つマウスは実験的Hh感染に感受性があり、上皮過形成に伴う結腸・盲腸の重度の炎症（チフルコリン炎）を起こす22.。 23 同様に、野生型マウスの Hh 感染と抗 IL-10R モノクローナル抗体の同時投与は、強固な T helper type 1/type 17 (Th1/Th17) – polarized effector T cell response とともに IL-23 依存性の腸炎を引き起こす。Hh 感染し抗 IL-10R 抗体を投与したマウスは、非感染あるいは単独投与のコントロールではなく、感染後 2-3 週以内に大腸炎の組織学 的特徴を呈する (Figure 1a)． Hhおよび抗IL-10R処理マウスはさらに、好中球およびMHCII+単球の優勢な集団を含む、固有層内の白血球の著しい浸潤を示す（図1b）（図1cおよび補足図S1aオンライン）。 非炎症結腸では、血液から固有層に入った単球は、CD64、MHCII、F4/80およびCD11cを高レベルで発現する組織マクロファージ11（CD11b+ CX3CR1hi Ly6Clo細胞、緑のサブセットとして定義）を優先的に生成する（図1d、補図S1b）。 しかし、この過程は炎症時に劇的に変化し、大腸固有層内にMHCII+単球（CD11b+ CX3CR1int Ly6Chi細胞、赤色サブセットとして定義）が著しく集積していることが観察された。 これらの細胞は、CD64とMHCIIの発現、およびF4/80、CD24、CD11cの中間レベルによって特徴付けられる（図1c-eおよび補足図S1a）。 定常状態では、MHCII+単球およびマクロファージは、抗炎症性マクロファージ機能に関連するマーカーであるマンノース受容体（CD206）を発現している24。しかし、大腸炎時にはMHCII+単球およびマクロファージでCD206の発現が低下しており（図1f）、単球のみならずマクロファージの機能も炎症時に変化することが示唆された。 実際、炎症時にはMHCII+単球はtumor necrosis factor-αやIL-6タンパク質、Nos2（誘導性一酸化窒素合成酵素）mRNAを多く発現し、マクロファージでもIL-6が増加することが分かった（補足図S1c）。 MHCII+単球とマクロファージの両方によるIL-10産生も炎症中に増加し（補足図S1c）、炎症駆動型の負のフィードバック経路を反映している可能性が最も高い。 CX3CR1GFP/+マウスをHhに感染させ，抗IL-10Rモノクローナル抗体（mAb）で処理するか，または示したようにそれぞれの単独対照で処理し，感染していない対照（Ctrl）と比較した。 マウスは2-3週間後に分析した。 (a)結腸の病理組織学的スコア。 (b)マウス1匹あたりの大腸固有層の総細胞数。 (c）全大腸CD11b+白血球中の骨髄系細胞サブセットの頻度。 (d) 蛍光活性化セルソーティング(FACS)プロットおよび(e) ヒストグラム。 MHCII+単球（CD11b+ CX3CR1int Ly6Chi、赤いサブセット）、マクロファージ（CD11b+ CX3CR1hi Ly6Clo細胞、緑のサブセット）、CD11b+ DC（CD11c+ CD103- CD11b+ CX3CR1int 細胞、灰色のサブセット）、CD103+ DC（CD11c+ CD103+ CX3CR1-細胞、オレンジのサブセット）の表示されたミエロイドサブセットに関する（e）の代表的な蛍光活性化細胞ソーティングのグラフ。 すべての細胞は、好中球と好酸球を除く生きたCD45+白血球に前駆体化した。 CD11b+ MHCII+細胞の蛍光マイナス1（FMO）対照を示す。 (f）フローサイトメトリーによって決定された、示されたサブセット中のCD206+細胞の頻度。 データポイントは個々のマウスを表し、バーは中央値を示す。 すべてのデータは、少なくとも2つの独立した実験の代表値である。 **P<0.01、***P<0.001は、ボンフェローニの事後検定による一元配置分散分析（ANOVA）によって決定されたものである。 DC, 樹状細胞; IL-10, インターロイキン-10; LPL, lamina propria leukocyte.
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MHCII+ 単球はマクロファージへの分化に加えて、マクロファージと従来のDCに関係するLy6Clo CX3CR1int 異質サブセットへの分化も示されてきた11。 この異種コンパートメントのうち、CD11b+ DC（CD11c+ CD103- CD11b+ CX3CR1int細胞、灰色のサブセットとして定義）は、恒常性条件下でマクロファージと容易に区別することができる。 CD11b+DCはMHCII、CD24、CD11cを発現するが、マクロファージによく見られるマーカーであるCD64とF4/80の発現はない（図1dおよび補足図S1b）。 しかし、マクロファージとCD11b+ DCの区別は、CD64を発現する集団の出現によって炎症中に曖昧になり（図1d,e）、これらの細胞が定常状態のマクロファージまたはCD11b+ DCとどのように存在形態的および機能的に関連しているかは、現在のところ不明であった。
大腸炎の間、MHCII+単球の著しい蓄積は、CD45+薄層細胞中のマクロファージ、CD11b+DC、およびCD103+DC（CD11c+CD103+CX3CR1-細胞、オレンジ色のサブセットとして定義）の頻度の減少と相関した（図1c,d）。 しかし、絶対数はCD11b+ DCとCD103+ CD11b+ DCのわずかな増加を示していた。 一方、マクロファージの数は変化せず、CD103+ CD11b- DCはわずかに減少した（補足図S1a）。
IL-10R遮断の存在下でのHh感染は、骨髄区画の劇的変化を伴う腸の炎症を誘発した。 大腸固有層に顆粒球とMHCII+単球が優位に集積していることが確認された。 さらに、MHCII+単球とマクロファージはより炎症性のプロファイルを獲得した。
CD11c+ 単核食細胞はIL-23の産生を介して大腸炎を引き起こす
Hh+anti-IL-10R モデルにおいて、IL-23がこのモデルの主要駆動力とされているので23、次に、単核食細胞によるIL-23産生の大腸炎の進展に対する機能的関連性を調べた。 そこで、ItgaxによってコードされるCD11cプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（GFP）とCreリコンビナーゼを発現するマウスとIl23a遺伝子の4つのエキソンを挟む2つのloxPサイトを持つマウス27を交配し、Cd11c-cre.Il23afl/fl (CD11cIL-23-) マウスを作製した。
CD11cIL-23-マウスはCD11cプロモーターの制御下でGFPを発現するため、CX3CR1-GFPレポーターマウスと交配できないので、これらのマウスの骨髄区画を評価するために別のゲート戦略に頼った（補足図S2）。 定常状態では、CD11cIL-23-マウスは、IL-23欠損同胞（CD11cIL-23+）と同様の数の白血球を結腸内に有し（補足図S3a）、骨髄系細胞またはT細胞の頻度における有意な変化は観察されなかった（補足図S3b）。 しかし、IL-23は分化したTh17細胞の維持に必要であるため28、CD11cIL-23-マウスは大腸のIL-17+およびIL-17+ IFNγ+ CD4+ T細胞のレベルが強く減少していることを示した（補足図S3c）。
Hhの感染と抗IL-10R処理により、CD11cIL-23-マウスはCD11cIL-23+マウスと比較して大腸炎が著しく減少し、大腸と盲腸全体で上皮性陰窩過形成と白血球浸潤が減少した（図2a,b)。 CD11cIL-23-マウスはまた、脾臓腫大の発生を示さず（図2c）、全身性疾患の徴候からも保護されていることが示された。 CD11cIL-23-マウスで観察された病理学の減少は、Hhコロニー形成レベルがCD11cIL-23-群とCD11cIL-23+群で同様であったことから、細菌負荷の差によるものではなかった（図2d）。 病理学的変化の減少と一致して、CD11cIL-23-マウスの結腸では、HhおよびIL-10R遮断後、自然および適応エフェクターサイトカインの両方が強く減少し（図2e）、IL-23自体の量も減少していた（図2f）。
CD11c+細胞からのインターロイキン23（IL-23）はヘリコバクター・ヘパチカス（Hh）誘発大腸炎を駆動する。 CD11cIL-23+およびCD11cIL-23-マウスに抗IL-10Rモノクローナル抗体（mAb）投与と合わせてHhを感染させ，3週間後に解析した。 未感染マウスをコントロールとした。 (a) 大腸および盲腸のヘマトキシリン・エオジン染色切片の代表顕微鏡写真（バー200μm）および病理組織学的スコアの写真。 (b)マウス1匹あたりの層状突起細胞の総数。 (c)脾臓重量。 (d）定量的PCR（qPCR）により定量化したHhコロニー形成レベル。 (e,f)48時間培養した非刺激性平板状突起細胞の上清について、(e)マルチプレックスフローサイトメトリーアッセイ、(f)酵素結合免疫吸着法（ELISA）によりサイトカイン発現を評価した。 データは2つの独立した実験からプールされたもので、4つの実験の代表である。 a-c）一元配置分散分析（ANOVA）とボンフェローニの後検定、または（d-f）マン・ホイットニーのU検定により決定された **P<0.01, ***P<0.001. IFNγ、インターフェロン-γ；TNF、腫瘍壊死因子-α。
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白血球浸潤の減少に伴い、CD11cIL-23-マウスは、Hh感染およびIL-10R遮断後に、同様に処理したCD11cIL-23+同腹子と比較して、層状突起内のMHCII-およびMHCII+単球（図3a）および好中球（補足図S3d）の両方の頻度と数の減少が見られた。 CD11cIL-23-マウスにおける単球の低浸潤は、ラミナプロプリアマクロファージの高い頻度と相関していたが、CD11b+ DCおよびCD103+ DCの頻度は変わらず、絶対数が減少した（補足図 S3d）。
MHCII+ monocytes and pathogenic T cells are reduced in Helicobacter hepaticus (Hh) infected and anti-IL-10R-treated CD11cIL-23- mouse. CD11cIL-23+およびCD11cIL-23-マウスを抗IL-10Rモノクローナル抗体（mAb）処理と組み合わせたHhに感染させ、3週間後に解析した。 (a) 代表的な蛍光活性化セルソーティング（FACS）プロット、CD45+白血球中の頻度、および大腸固有層における示された骨髄系サブセットの絶対数。 (b) CD45+白血球の中のCD4+ T細胞の頻度。 (c) 代表的なFACSプロットと、フォルボール12-ミリスチン酸13-酢酸（PMA）およびイオノマイシンで再刺激したときのCD4+ T細胞中のIFNγ+、IFNγ+ IL-17A+、およびIL-17A+細胞の出現頻度。 データポイントは個々のマウスを表し、バーは中央値を示す。 データは2つの独立した実験の代表値である。 *P<0.05, **P<0.01 Mann-Whitney U-testによって決定される。 IFNγ、インターフェロン-γ；IL、インターロイキン；MHCII、主要組織適合性複合体クラスII；TCR、T細胞受容体。
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IL-23はT細胞に直接作用して腸の炎症を促進し、大腸での蓄積と増殖を促進するので、29 大腸炎中のCD11cIL-23-マウスとCD11cIL-23+マウスの大腸T細胞コンパートメントについて検討した。 CD11cIL-23-マウスは、IL-23欠損の同胞と比較して、大腸CD4+ T細胞の低い頻度を示した（図3b）。 CD11cIL-23+マウスは、シングルおよびダブル産生IL-17A+/IFNγ+T細胞の出現によって特徴づけられる強固なTh1/Th17エフェクター反応をマウントしたのに対し、CD11cIL-23マウスは対応するサイトカインの軽い誘導のみを示した（図3c）
全体として、CD11cIL-23-マウスにおける大腸炎の不在は、CD11c-発現MNPsによるIL-23の生産が腸炎症反応において非余裕な役割を果たすことを示唆した。
MHCII+ monocytes and macrophage are the major source of IL-23 upon H. hepaticus infection
IL-23-proficient mouseにおける大腸炎発症に関連する一連の出来事をより理解するために、我々はまず大腸lamina propriaから精製した白血球のIL-23発現を観察した。 IL23a mRNAの発現は大腸炎発症後4-5日で一貫して検出可能であった（図4a）。このことは、大腸におけるIL-23の初期産生に組織常在および／または急速に動員される細胞サブセットが関与していることを示唆している。 したがって、この時点をその後の解析に選んだ。 Hh感染および抗IL-10R処理後4日目に、CD11cIL-23+マウスは、感染していないコントロールマウスと比較して、固有層における白血球の浸潤が増加していた（図4b）。 この流入は、結腸内のすべてのMNPサブセット数の増加（補足図S4a、b）と相関し、またMHCII-およびMHCII+単球（図4c、d）、好中球（図4d）、CD103+ CD11b-DC、およびCD103+ CD11b+DC（図4e）の頻度も増加した。 しかし、全白血球中のマクロファージおよびCD11b+ DCの頻度は、この時点で変化しなかった（図4d）。
MHCII+ 単球およびマクロファージが、Helicobacter hepaticus（Hh）誘発大腸炎中のインターロイキン23（IL-23）の主要生産者となった。 CD11cIL-23+マウス（Cre-GFP+）を抗IL-10Rモノクローナル抗体（mAb）処理と組み合わせてHhに感染させ、非感染のコントロール（Ctrl）と共に感染4日後に分析した。 (a) 示した時点で5匹のマウス個体から採取した大腸組織におけるIl23a mRNA発現の定量的PCR (qPCR)分析。 (b）4日目におけるマウス1匹当たりの層状固有細胞の総数。 (c）代表的な蛍光活性化細胞選別（FACS）プロット、および（d，e）結腸CD45+白血球中の示された骨髄系サブセット（補足図S2に定義）の頻度。 (f,g) CD11c-Cre関連緑色蛍光タンパク質（GFP）発現対(f) CD11cおよび(g) MHCIIの代表的なFACSプロットである。 (h) 大腸白血球からFACS選別したCre-GFP+細胞およびCre-GFP-細胞によるIl23a mRNA発現のqPCR分析。 (i) 示した大腸骨髄系サブセットにおけるCD11c-Cre関連GFP発現の頻度。 j）CD11cIL-23+およびCD11cIL-23-マウスからFACSで選別した骨髄系サブセットによるIl23a mRNAの発現のqPCR分析。 CD11cIL-23+マウスとCD11cIL-23-マウスの細胞を比較した統計値を示す。 (k) FACSで選別したMHCII-およびMHCII+単球によるIl23a mRNA発現のqPCR分析。 データポイントは個々のマウスを表し、バーは中央値を示す。 FACS選別された細胞のすべての棒グラフは、2つの生物学的複製で選別された10〜15匹のプールされたマウスの平均±s.e.m.を表している。 データは2つの独立した実験の代表値である。 *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001, (a, j) 一元配置分散分析 (ANOVA) とボンフェローニの後検定または (b-h, k) Mann-Whitney U-test によって決定される。 DC、樹状細胞；MHCII、主要組織適合性複合体クラスII.
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IL-23依存性腸炎症に関与する骨髄系サブセットをさらに特徴付けるために、CD11cIL-23+マウスからの層状突起細胞によるCD11c-Cre関連GFP発現について検討した。 CD45+細胞の分析により、Cre-GFPの発現は細胞表面にCD11cを発現する白血球に限定されるが（図4f）、CD11chi細胞で優位に観察されることが確認された。 さらに、Cre関連GFP蛍光はMHCII+細胞でのみ観察され（図4g）、興味深いことに、Il23a mRNAの発現はCre-GFP+細胞に限定された（図4h）。 層状固有層のMNPの大部分は、高レベルのCD11cを発現している（図1eおよび補足図S1b）。 CD11cIL-23+マウスにおける明瞭な骨髄サブセットの分析により、CD11c-Cre関連GFP発現は、マクロファージ、CD103+ CD11b- DC、CD103+ CD11b+ DC、（図4i）、およびCD11b+ DC（示さず）の間で優勢に検出されることが判明した。 さらに、MHCII+単球の半分以上がCre-GFPに陽性であり、これらのサブセットのすべてがIL-23の潜在的供給源である可能性を示している。 一方、好酸球、好中球、MHCII-単球にはCreの発現が見られなかった（図4i）。
これらのサブセットのうちどれがin vivoでのIL-23の機能的供給源であるかを明らかにするために、IL-10R遮断存在下でHh感染4日後にCD11cIL-23マウスとCD11cIL-23+マウスからフローサイトメトリーによって選別した該当集団によるIL23a mRNA発現を評価した。 驚くべきことに、CD11cIL-23+細胞におけるIl23a mRNAの発現は、ほとんどがMHCII+単球とマクロファージに限られ、CD103+ CD11b- DCとCD103+ CD11b+ DCでは低い発現が検出できた（図4j）。 さらに、MHCII+単球とマクロファージの両方によるIl23a発現は、CD11cIL-23-マウスで著しく減少し、CD11c-Cre発現がこれらの細胞サブセット内で活性化していることが示された（図4j）。 MHCII-単球で観察された低いIl23a発現（図4k）は、IL-23の誘導が、それらの局所成熟およびMHCIIの獲得中に層状突起で起こることを示唆している。
CX3CR1の発現レベルがMNPの個別のサブセットを識別するので、CX3CR1GFP/+マウスで分析を繰り返した。 非感染マウスでは、MHCII+単球、CD103+CD11b+DC、（補足図S4c、d）、およびCD11b+DC（補足図S4d）において、低レベルの構成的Il23aが検出された。 しかし、HhおよびIL-10R遮断による感染後4日目におけるIl23aの発現増加は、MHCII+単球（補足図S4d）およびマクロファージ（図示せず）においてのみ、一貫して検出されていた。 炎症の経過中、高いIl23a発現はMHCII+単球とその発生子孫で維持されたが、CD103+ DCでは維持されなかった（図5a）。 CX3CR1intサブセットのうち、Il23aの発現はさらにCD64+細胞に制限された（図5b）。
大腸炎中のインターロイキン23（IL-23）生成はCX3CR1-発現CD64+サブセットに制限されている。 CX3CR1GFP/+マウスをHelicobacter hepaticus（Hh）に感染させ，抗IL-10Rモノクローナル抗体（mAb）処理を併用し，感染から2週間後に非感染対照（Ctrl）と共に解析した。 大腸粘膜固有細胞をフローサイトメトリーで選別し、Il23a mRNAの発現を定量PCR（qPCR）で解析した。 (a) Il23a mRNA発現と、以下の選別集団の代表的な蛍光活性化セルソーティング（FACS）プロット。 (1）MHCII+単球（Mono）、（2）Ly6Clo CX3CR1intマクロファージ/DC、（3）CX3CR1hiマクロファージ、および（4）CD103+DCの選別集団のIl23a mRNA発現と代表的な蛍光活性化セルソーティング（FACS）プロット。 (b) 以下の選別された集団のIl23a mRNA発現と代表的なFACSプロット。 (1) CX3CR1int MHCII+ CD64-および(2) CX3CR1int MHCII+ CD64+細胞。 棒グラフは、2つの生物学的複製でソートされた10-15匹のプールマウスの平均+s.e.m.を表す。 データは3つの独立した実験の代表値である。 **P<0.01、***P<0.001、ボンフェローニの後検定による一元配置分散分析（ANOVA）によって決定される。 DC、樹状細胞；Macs、マクロファージ；MHCII、主要組織適合性複合体クラスII；Mono、単球；NS、有意ではない＜4791＞＜2569＞PowerPointスライド＜4791＞＜4099＞＜4995＞＜4099＞＜2569＞まとめると、我々のデータは、大腸炎におけるIL-23の誘導が、MHCIIおよびCD64も発現するCX3CR1発現CD11c＋細胞内に含まれていることを示すものである。
Batf3-dependent CD103+ DC is dispensable for chronic colitis
CD103+ CD11b+ DCはマウス小腸に多く、大腸にはほとんど存在しない6。 30 Batf3-/-マウスは、組織常在のCD8α+およびCD103+ CD11b-非リンパ系DCサブセットを欠いている。 予想通り、CD103+ CD11b-細胞はBatf3-/-マウスの大腸固有層で強く減少したが、CD103+ CD11b+DCは影響を受けなかった（図6a,b）。 CD103+ CD11b- DCが大腸炎の発症に関与しているかどうかを評価するために、Batf3-/-マウスに抗IL-10R処理と組み合わせてHhを感染させた。 大腸炎発症2週間後、CD103+ CD11b- DCの数は、依然として固有層で著しく減少していた（図6b）が、白血球浸潤（図6c）および大腸炎の重症度（図6d）は、野生型と比較してBatf3-/-マウスで観察されなかったので、このモデルにおけるIL-23駆動の腸炎症の誘導にBatf3依存DCが必要ないことが示された。
Batf3-dependent dendritic cells（DC）はHelicobacter hepaticus（Hh）-drivenコロシアムのインターロイキン23（IL-23）の生産に必要でないことが明らかになった。 野生型（WT）およびBatf3-/-マウスを抗IL-10Rモノクローナル抗体（mAb）処理と組み合わせてHhに感染させ、2週間後に非感染対照（Ctrl）と共に分析した。 (a) 蛍光活性化セルソーティング（FACS）プロット、(b) CD45+大腸白血球中のCD103+ CD11b-およびCD103+ CD11b+細胞の頻度および数。 (c)マウス1匹あたりの層状突起細胞の総数。 (d) 結腸の病理組織学的スコア。 データポイントは個々のマウスを表し、バーは中央値を示す。 *4791>
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Mature macrophage produce IL-23 in response to H. colon.（H. colonに応答して成熟マクロファージがIL-23を産生する）． しかし、生体内ではMHCII+単球と機能的に重複している
マクロファージのIL-23産生への寄与を明らかにするために、CD11cIL-23マウスとCD11cIL-23+マウスから骨髄由来マクロファージ（BMDMs）を作製した。 L929細胞調整培地で分化させた後、約半数のBMDMはCre-GFP陽性で、CD64、F4/80、CD11cを発現した（補足図S5a）。 BMDMを抗IL-10R抗体存在下で生きたHh菌でin vitro刺激し、その反応をそれぞれのコントロールと比較した。 驚くべきことに、CD11cIL-23+ BMDMsをHhで刺激するとIl23a mRNAが発現し、この反応はIL-10Rシグナル遮断の存在下で増強されたが、Il23aは未刺激BMDMsまたは抗IL-10R抗体のみで処理したものでは発現しなかった（補足図S5b）。 同様に、Hhに感染したマウスは、in vivoで単球とマクロファージにIL-23の低いバーストを誘発するだけで、この反応はIL-10Rシグナルがない場合に強く増加した（補足図S5c）
腸組織マクロファージはもっぱら血液単球から派生し自己再生しない8.5。 10 コロニー刺激因子1受容体（CSF-1R）シグナルは、Ly6ChiからLy6Clo単球への分化を制御し31、常在型Ly6Clo単球および組織マクロファージの成熟と置換に必要であるが、Ly6Chi単球産生または炎症機能には必要でない32。 MHCII+単球と組織マクロファージのIL-23依存性腸炎発症への相対的寄与を評価するために、CX3CR1GFP/+マウスに抗CSF-1R遮断mAbまたはアイソタイプコントロールを大腸炎誘発前に前処理した。 マウスの一群を0日目に分析し（補足図S6a,b）、一方、残りのマウスはHhと抗IL-10Rで処理し、抗CSF-1R処理を継続した。 Hh感染および抗IL-10R処理後4日目には、抗CSF-1R処理マウスの大腸からマクロファージがほとんど見られなくなった。 異種Ly6Clo CX3CR1intマクロファージ/DCコンパートメントもこれらのマウスで著しく減少した（図7a、bおよび補遺図S6c）。 大腸白血球の総数は変化しなかったが（図7c）、これらの条件下では顆粒球の割合が増加した（図7d）。 興味深いことに、マクロファージの枯渇はさらに、4日目における層状固有膜内のIl23a発現の増加と相関していた（図7e）。 しかしながら、大腸炎の全経過を通して抗CSF-1Rを介したマクロファージの枯渇は、Hh感染とIL-10Rシグナル遮断の2週間後に結腸に蓄積する炎症細胞の数（図7f）や腸の病理の重症度（図7g）に影響を与えなかったことから、MHCII+単球とマクロファージは炎症時に機能的冗長を示す可能性があることが示唆された。
マクロファージはインターロイキン23（IL-23）生産についてMHCII+単球と機能的冗長性を共有している。 CX3CR1GFP/+マウスをブロッキング抗CSF-1Rモノクローナル抗体（mAb）またはアイソタイプ（Iso）コントロールで処理し、（a〜e）ヘリコバクター・ヘパティカス（Hh）および抗IL-10R mAb処理後4日または（f、g）2週間後に分析した。 (a) 代表的な蛍光活性化セルソーティング（FACS）プロットおよび(b) 図1cで定義した、示された骨髄系サブセットのCD45+白血球中の頻度。 (c)マウス1匹あたりの大腸固有層の総細胞数。 (d)CD45+細胞中の好中球の頻度。 (e）4日目に分析した全大腸平膜細胞によるIl23a mRNA発現の定量的PCR（qPCR）分析。 (f）Hhおよび抗IL-10R mAb処理2週間後のマウス1匹当たりの大腸辺縁系細胞の総数。 (g)大腸病理学的スコア。 データポイントは個々のマウスを表し、バーは中央値を示す。 データは2つの実験からプールされたものであり、3つの独立した実験の代表である。 *P<0.05, **P<0.01, Mann-Whitney U-testにより決定。 CSF、コロニー刺激因子；DC、樹状細胞；Macs、マクロファージ；MHCII、主要組織適合性複合体クラスII；NS、有意ではない；Uninf、非感染。
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