Immunocytochemistry in Intraepithelial Neoplasia and Invasive Cancer
To classify cervical intraepithelial neoplasia…子宮内膜上皮細胞増殖症（CVD）。 細胞病理学者は、核の高色度化、核異型度、核細胞質比などの細胞形態学的基準に依拠している。 このような分類では、CIN病変の生物学的挙動を予測することはできない。 子宮頸部組織の組織学的検査に適用できる生物学的マーカーや代替エンドポイントバイオマーカーが大量に開発されている。 これらのマーカーは通常、子宮頸部病変の退行性または進行性の挙動を正しく予測する上で「非常に有望」であると紹介されている。 しかし、日常診療では、これらのマーカーの適用性は、むしろ期待はずれである。 CINが子宮頸部上皮細胞の増殖活性の進行性機能障害に関係することを示唆する初期の観察結果から、開発された生物学的マーカーのほとんどは、細胞周期の制御経路において重要な役割を果たす蛋白質である。 これらの生物学的マーカーのうち、特に子宮頸部組織検査に適したものの概要については、第1章を参照されたい。 子宮頸部細胞診では、スクリーニングはパパニコロウ染色された塗抹標本で行われ、通常、追加研究のための残りの材料がないため、生物学的マーカーの選択は歴史的にかなり制限されている。 また、液状細胞診のような直接湿潤細胞診標本での免疫細胞化学を成功させようとすると、アルコールあるいはアセトンでの短時間固定が必要である。 このマイルドな固定を適切に行い、再現性のある免疫細胞化学的染色結果を得ることができるのは、高度な技術と管理の行き届いた研究室のみである。
個々のケラチンに対する鎖特異的モノクローナル抗体（mAbs）の開発により、予備細胞、未熟および成熟扁平上皮、正常子宮外頸扁平上皮および内頸柱上皮、ならびに異なるタイプの上皮異常（CIN grade 1、2、3）を免疫細胞化学的に区別することができるようになった。123,228-230
同じケラチンポリペプチドの異なるエピトープに対する複数のモノクローナル抗体（例えばケラチン18に対する異なるmAb）を用いることにより、生物活性や腫瘍性転換に起因する構造変化を検出することが可能である。 扁平上皮癌の分化の程度は、ケラチン10または13抗体の使用により決定することができる。 ケラチン10は、角化のマーカーである。
Broadly Crossacting mAbsは、分化度の異なる扁平上皮癌や小細胞退形成癌を含む、事実上すべての上皮組織、原発性および転移性上皮癌に陽性反応を示す。 ケラチン18に対する抗体は、特に腺癌を認識することができるが、通常扁平上皮癌とは反応しない231。腺癌はほとんど常にケラチン5、10、13、16に対して陰性である。 扁平上皮癌は、ほとんどの場合、ケラチン5、10、13、および16に対して陽性である。 ケラチン16の発現は角化型扁平上皮癌に限定される。 ケラチン7のmAbsは一般に（角化）扁平上皮に染色反応を示さない。 232
Moll と共同研究者は、未熟な扁平上皮ではサイトケラチン5、7、8、17、18、19が存在し、成熟扁平上皮と軽度異形成ではケラチン発現のパターンが変化することを示した233 (Fig. 8.125)． 1201>
Smedtsらは、子宮頸部異常上皮において、CIN grade 3でサイトケラチン10、11、13、16が不規則に分布することを見出した234、235 彼らは、陽性の分布が斑状であることを指摘した。 彼らは、陽性の領域と陰性の領域が交互に現れることを指摘した。 彼らは、正常上皮からCIN grade 1および2までのサイトケラチン含有量の一貫した漸進的な変化を証明することはできなかった。 彼らの観察によれば、形態学的にCIN grade 3とされる病変の発生時に急激な変化が起こったと考えられる。 CIN grade 2の子宮頸管侵入部の病変は，子宮頸管表面の病変と同じパターンを示した。 CIN grade 3における染色パターンは，浸潤性扁平上皮癌に見られるものと同程度であった。 Putsらは、ケラチンに対する抗サイトケラチン抗体を用い、様々な重症度の上皮性病変の間で染色反応の質的差異を認めなかった236。彼らは、32個の異形成病変に可変数のランゲルハンス細胞を認めたが、異なる重症度の病変間の分布に特定のパターンはなかった6。 彼らは、ランゲルハンス細胞の数の違いは、宿主反応の違いと同様に、異形成過程の違いに相関しているかもしれないと推測し、したがって、退行または進行の傾向の指標となる可能性がある。
Smedtsと共同研究者は、鎖特異的mAbsパネルを用いて、正常子宮頸部上皮、上皮形成不全、CIN grade 1, 2, 3におけるケラチンの発現について調べた237, 238。 これにより、個々のケラチン4、5、7、8、10、13、14、18、19を単細胞レベルで検出することができた。 その結果、予備細胞が未熟な扁平上皮に変化する過程で、この上皮は子宮外扁平上皮に典型的なケラチンを獲得し、予備細胞や柱状細胞に典型的なケラチンは失われたことがわかった。 この変化は、さらに成熟した扁平上皮に分化する際にも続いた。 1201>
上皮内新生物のグレード1から3にかけて上皮の異型度が増す過程で、単純上皮に特徴的なケラチンが異形成病巣に現れる（図8.126）。 CIN grade 1では約半数、CIN grade 2（中等度異形成）では1/3の症例でケラチン8と18が分散して陽性となるが、成熟扁平上皮では基底層を染色するケラチン19は極性を失い、異形成上皮の全厚みを染色し、しばしば不整脈を呈する部分が多くなっている。
成熟扁平上皮と比較して、ケラチン4、5、13、14の発現が減少し、染色パターンが不規則になった（図8.127、8.128）。
これらの変化はCIN grade 3でより顕著であり、すべての症例でケラチン8、18の発現が多く、ケラチン13、14の発現が減少し、完全に消失している部位もあった。 1201>
ケラチン8，18，19は，子宮頸部扁平上皮癌や腺癌で検出され，その発現は，異形成が進むと単純上皮に特有のケラチン模様の発現が増加することが強調された。 これらのケラチンの発現は、これらの細胞が、一方では扁平上皮異常への形質転換の段階を経て、他方では柱状細胞型の異常への分化を経て、二重の分化能を持つ共通の前駆細胞であることを示しているのかもしれない。 未熟な扁平上皮形質における扁平上皮型と柱状細胞型のケラチンの二重発現は、この仮説を支持しているようである228,229
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