Na current in membrane blebs: implications for channel mobility and patch clamp recording

enzymatically dissociated muscle fibersから記録中にルースパッチクランプピペットに吸引をかけたところ、ピペット内に大きな膜ブレーブが形成された。 このような吸引によるブリーブの研究は、ブリーブの中のイオンチャンネルが膜電流密度のルースパッチ電圧クランプ計測を複雑にしたり、無効にする可能性があるため開始されたものであった。 Naチャネルの横方向の移動度が低く (Stühmer and Almers, 1982)、終板や腱に急勾配がある (Caldwell et al., 1986) ことから、Naチャネルは細胞骨格要素に強固に結合しており、ブリードにはNaチャネルがほとんどないことが予想された。 ブリーブの形成は、膜面積の増加から予想されるように、膜容量の増加をもたらした。 このことは、ブリーブの中にNaチャネルが存在することを示している。 このことから、ブリーブはNaチャネルを有していることが示唆された。ブリーブの形成により、ピペットの外側の膜から脂質とNaチャネルが移動し、静電容量とNa電流が増加したと仮定すると、ピペットからブリーブを排出することにより静電容量とNa電流が元の値に戻ると予想された。 その結果、静電容量は元の値に戻ったが、Na 電流は予想より減少した。 この電流の減少は、Naチャネルがパッチ膜からblebに移動したためと考えられる。 ブリード膜とパッチ膜のNa電流をそれぞれの静電容量で規格化すると、ブリード膜のNaチャネル密度は通常の表面膜のほぼ50%であることがわかった。 このように、ブリーブはタンパク質を含まないわけではなく、また、ブリーブの起源である正常な表面膜を忠実に再現しているわけでもない。 この膜は膜脂質に富み、比較的タンパク質に乏しい。 2つの結論が導き出された。

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