Mass Cytometry
Mass CytoF (Fluidigm) は、フローサイトメトリーのバリエーションで、抗体が蛍光色素ではなく重金属イオンタグでラベルされているものです。 読み出しは飛行時間型質量分析計で行う。 これにより、チャンネル間で大きなスピルオーバーを起こすことなく、1つのサンプルでより多くの抗体特異性を組み合わせることができるようになりました。 イムノフェノタイピング、フェノタイピング＋細胞内サイトカイン染色（ICS）、フェノタイピング＋phospho-CyTOFのパネルを標準化し、それぞれ30～38種類の抗体を搭載しています。 詳しくは[email protected]。
イムノフェノタイピング。 33抗体のCyTOFイムノフェノタイピングパネルは、凍結保存PBMC用に設計されていますが、他のサンプルタイプにも適用可能です。
Intracellular cytokines: 当社の38抗体CyTOF ICSパネルは、主にT細胞応答の解析を目的としています。
Phospho-CyTOF：当社の30抗体Phospho-CyTOFパネルは、多くの異なる細胞サブセットにおけるシグナル伝達経路の広い範囲を読み取るために、示された刺激とともに使用することができます。 このパネルでの追加や置換は、固定エピトープでうまく機能するための表面マーカー抗体が必要なため、より困難です。
これら3つのCyTOFパネルの標準抗体一覧はこちらでご覧いただけます。 (2018年6月改訂）
CyTOFの実験上の問題点に関するMike Leipold博士のインタビュー動画は、https://www.youtube.com/watch?v=UYYq9jh7FgQ.
User Instructions
1.を参照してください。 アッセイを計画する CyTOFアッセイは、最大12サンプルのバッチで実行されます。 それ以上の検体がある場合、例えばケースとコントロールが別々のバッチにならないように、バッチをランダムにしてください。
2. 検体を採取する。 生きているPBMCのために最適化された凍結保存プロトコルを使用してください。 1クライオバイアルにつき10^7個の細胞を凍結し、上記の各アッセイに1つずつクライオバイアルを供給することを推奨します。 なお、PBMCの処理および凍結保存は、当社の血液処理部門でも行っております。
3.サンプルの実行 サンプルの実行：サンプルの実行には、オンラインでの注文が必要です。 納期はプロジェクトの規模や現在の作業量によって異なりますが、小規模なプロジェクトであれば、通常、発注からサンプル送付まで3～4週間以内に完了します。
4. データ解析 FlowJo ソフトウェアを使用した標準的なデータ解析を提供します。 ゲーティングされた集団のパーセンテージを記載したExcelレポート、およびゲーティング結果のPDFとすべてのfcsファイルは、Google Drive経由で提供されます。 標準的なパネルの場合、Excelデータは当社のオンラインデータベースであるStanford Data Minerに同時にアップロードされ、お客様の研究室の他のHIMCデータ、および臨床/人口統計データ（提供された場合）と統合することが可能です。 Data Minerのホームページの左上にあるヘルプリンクをクリックすると、このシステムの使用方法が表示されます。
統計相談は、HIMC統計コンサルティングサービスを通じて行うことができます。
プロトコル
詳細なラボプロトコルや、論文や助成金申請に適した短い記述については、プロトコルページを参照してください。
追加情報：
- Mass Cytometry Review (Trends in Immunology)
- Analyzing CyTOF data in FlowJo