6.3: Auxotrofi și medii selective

Mutanții met sunt auxotrofi Met, ceea ce înseamnă că nu pot crește în medii care nu conțin Met. Auxotrofii sunt microorganisme care sunt incapabile să sintetizeze un nutrient esențial din cauza unei mutații genetice. Multe tulpini de laborator sunt purtătoare de mutații multiple care interferează cu sinteza nutrienților esențiali. De exemplu, deoarece tulpina BY4742 este purtătoare de mutații în genele HIS3, LEU2, LYS2 și URA3, tulpina se va dezvolta numai în medii care conțin histidină, leucină, lizină și uracil. Tulpinile auxotrofe au multe utilizări în genetică. Cercetătorii folosesc adesea tulpini auxotrofe ca gazde pentru transformarea plasmidelor (capitolul 12). Plasmidele utilizate pentru transformare poartă alele funcționale ale unei gene care este defectă în tulpina gazdă, ceea ce face posibilă selectarea transformanților în funcție de capacitatea lor de a crește pe medii lipsite de nutrientul esențial.

Mediile de sinteză sunt un instrument esențial pentru cultivarea și studierea auxotrofilor, deoarece toate componentele sunt definite. Cercetătorii în domeniul drojdiei au dezvoltat o varietate de formulări diferite pentru mediile sintetice. Toate mediile sintetice conțin o sursă de carbon (de obicei D-glucoză), o sursă de azot, precum și vitamine și minerale esențiale. Vitaminele și mineralele sunt, de obicei, achiziționate
într-o formulă cunoscută sub numele de bază azotată de drojdie (YNB). Suplimentele adăugate în mediile sintetice pot fi adaptate pentru a susține sau a selecta împotriva creșterii anumitor genotipuri. În acest curs, vom folosi mediul Yeast Complete (YC), care susține creșterea majorității tulpinilor de S. cerevisia. Rata de creștere a tulpinilor de tip sălbatic în YC este oarecum mai lentă decât în medii bogate, cum ar fi YPD, dar tulpinile sunt viabile pentru perioade lungi de timp. Tabelul de pe pagina următoare prezintă compoziția YC, care include un aport bogat de aminoacizi și baze nucleotide. În plus față de mediul YC complet, vom folosi și medii selective în care unele componente au fost omise. De exemplu, în acest laborator, vom folosi mediul YC-Met „drop-out”, care conține toate componentele YC din tabelul următor, cu excepția metioninei.

.

Lasă un comentariu