Autoradiografie

Autoradiography

Autoradiografia unui Southern Blot

Autoradiografia este o clasă de tehnici în care pozițiile materialului biologic marcat cu radioizotopi realizează o autoradiogramă („autofotografie”). Radioizotopii, cum ar fi 14C, 32P, 35S, emit radiații care expun pelicula fotografică sau cu raze X. Substituirea 32P în coloana vertebrală a ADN-ului sau a 35S în aminoacizii care conțin sulf permite detectarea moleculelor marcate.

Un filtru Southern Blot este plasat în interiorul unei cutii de casetă rezistentă la lumină (stânga) și suprapus cu o folie de film cu raze X. Caseta se închide și se lasă timp de câteva ore până la câteva zile. ADN-ul marcat cu radioizotopi expune filmul, care, atunci când este developat, arată un model de benzi negre care indică pozițiile ADN-ului marcat în blot. Semnele de aliniere în trei din cele patru colțuri sunt realizate cu cerneală specială care expune, de asemenea, filmul. Blot-ul poate fi aliniat cu filmul cu ajutorul celor trei semne de indexare (cu semnele de indexare, este posibilă o singură aliniere). În unele experimente, alinierea poate fi folosită pentru a localiza o anumită bandă de ADN pe blot și a o tăia, pentru a recupera ADN-ul pentru experimente ulterioare.

Lasă un comentariu