O cromatogramă este, în esență, rezultatul unui proces de cromatografie. Este un fișier electronic sau o copie pe hârtie care conține informațiile generate în timpul cursei de cromatografie.
Există multe variații diferite cu privire la ceea ce este afișat pe o cromatogramă – în funcție de setările utilizate în fiecare laborator și de orice cerințe de reglementare. Ca exemplu, minimul afișat pe o cromatogramă GC a unei probe în curs de procesare ar putea fi:
- Identificarea probei (Produs, număr de lot, numărul etapei)
- Informații despre probă (greutatea sau concentrația probei)
- Data și ora la care s-a făcut injecția
- Numele sau identificarea analistului
- Identificarea instrumentului și numele metodei analitice utilizate
- Numele fișierului și locația datelor brute generate în timpul rulării
- Înregistrarea graficului care arată vârfurile generate și linia de bază, cunoscută sub numele de trace
- Results table (conținând date brute și date calculate)
În prezent, generarea unui tabel de rezultate este în mare măsură un proces automatizat, dar nu a fost întotdeauna atât de simplu….
Hârtie pătrată și foarfecă
Înainte ca analiza datelor și integrarea digitală să devină un standard – hârtia grafică și foarfeca se găseau pe raftul fiecărui analist.
Un înregistrator grafic, conectat la detector, înregistra urma direct pe hârtie pătrată sau hârtie grafică folosind un creion cu cerneală. Pornind de la urmă, existau două metode utilizate în mod obișnuit pentru a calcula rezultatele:
Contarea pătratelor:
Analiștii foloseau o riglă și un stilou pentru a desena cea mai bună formă a vârfului (triunghi) și linia de bază. S-a numărat apoi numărul de pătrate din fiecare triunghi. Această numărătoare a fost apoi folosită împreună cu atenuarea detectorului și s-a calculat compoziția probei.
Tăierea și cântărirea:
A fost construită o linie de bază pentru vârfurile care au fost înregistrate. Picurile au fost apoi decupate și cântărite. Aria vârfurilor fiind proporțională cu greutatea, cu condiția ca grosimea hârtiei și conținutul de umiditate să fie uniforme. Trucuri precum fotocopierea urmei și mărirea urmei ar putea fi folosite pentru a crește precizia.
Așa cum se poate imagina, vârfurile care se suprapun și probele care conțin o mulțime de constituenți diferiți ar putea cauza probleme serioase unui analist. Acum, computerele ajută la reducerea erorilor.
Citerea unei cromatograme
Deși instrumentarul modern a eliminat o mare parte din presupunerile de pe vremea când se folosea hârtia și foarfeca, abilitatea de a citi și interpreta o cromatogramă este la fel de importantă în zilele noastre.
Trasa trebuie verificată întotdeauna, deoarece aceasta va fi primul indiciu dacă ceva nu a mers bine cu cromatografia. Verificările simple includ:
- Apare linia de bază OK, plată și fără prea mult zgomot?
- Sunt formele vârfurilor acceptabile? Nu prea multă asimetrie, frumos și ascuțit și la scară
- Există numărul corect de vârfuri? Vreun pic în plus sau lipsă?
- Picurile de referință și ale etalonului intern sunt identificate corect, iar timpii de retenție sunt OK?
Deși toate datele sunt înregistrate și calculele sunt făcute pentru analist, este treaba analistului să se asigure că nu au fost făcute erori. O discuție despre analiza datelor în sistemele moderne se găsește în acest articol: Automated Analysis of Open-Access HPLC Instrumentation Metrics.
.