Citometrie de masă
Citometria de masă sau CyTOF (Fluidigm) este o variație a citometriei în flux în care anticorpii sunt marcați cu markeri de ioni de metale grele în loc de fluorocromi. Citirea se face prin spectrometrie de masă în timp de zbor. Acest lucru permite combinarea mai multor specificități ale anticorpilor într-o singură probă, fără o răspândire semnificativă între canale. Avem panouri standardizate pentru imunofenotipare, fenotipare + colorare cu citokine intracelulare (ICS) și fenotipare + fosfo-CyTOF, fiecare cu 30 până la 38 de anticorpi. Contactați [email protected] pentru detalii.
Imunofenotipare: Panoul nostru de imunofenotipare CyTOF cu 33 de anticorpi este conceput pentru a fi utilizat cu PBMC crioconservate, deși ar putea fi adaptat pentru alte tipuri de probe. Un număr limitat de anticorpi suplimentari pot fi adăugați la canalele deschise, în funcție de disponibilitate.
Citokine intracelulare: Panoul nostru de 38 de anticorpi CyTOF ICS vizează în primul rând disecția răspunsurilor celulelor T. Sunt posibile substituții limitate (cu cele comune enumerate).
Fosfo-CyTOF: Panoul nostru de 30 de anticorpi fosfo-CyTOF poate fi utilizat cu stimulii indicați pentru a citi o gamă largă de căi de semnalizare în multe subseturi celulare diferite. Adaosurile sau substituirile în acest panou sunt mai dificile, datorită cerinței ca anticorpii markeri de suprafață să funcționeze bine pe epitopi fixați.
Vezi lista de anticorpi standard în aceste trei panouri CyTOF aici. (revizuit în iunie 2018)
Pentru un interviu video cu Dr. Mike Leipold pe probleme experimentale CyTOF, consultați https://www.youtube.com/watch?v=UYYq9jh7FgQ.
Instrucțiuni de utilizare
1. Planificarea analizei dumneavoastră: Testele CyTOF se execută în loturi de până la 12 probe. Dacă aveți mai multe probe, vă rugăm să încercați să randomizați loturile astfel încât, de exemplu, cazurile și controalele să nu fie segregate în loturi separate.
2. Colectarea probelor: Vă rugăm să utilizați un PROTOCOL optimizat de CRIOPRESERVARE pentru PBMC viabile. Vă recomandăm să congelați 10^7 celule per criovial și să furnizați un criovial pentru fiecare dintre testele de mai sus. Serviciile de procesare și crioconservare a PBMC sunt, de asemenea, disponibile prin intermediul Unității noastre de procesare a sângelui.
3. Executarea probelor dvs: Este necesară o comandă online înainte ca probele să poată fi rulate. Timpul de execuție variază în funcție de mărimea proiectului dvs. și de volumul de lucru curent; proiectele mai mici pot fi finalizate, de obicei, în termen de 3-4 săptămâni de la plasarea comenzii și livrarea probelor.
4. Analiza datelor: Oferim o analiză standard a datelor utilizând software-ul FlowJo. Un raport Excel cu procentele tuturor populațiilor gated, precum și pdf-urile cu rezultatele gating și toate fișierele fcs, sunt furnizate prin Google Drive. Pentru panourile standard, datele din Excel sunt încărcate simultan în baza noastră de date online, Stanford Data Miner, unde pot fi integrate cu alte date HIMC din laboratorul dumneavoastră, precum și cu date clinice/demografice, dacă sunt furnizate. Faceți clic pe linkul de ajutor din colțul din stânga sus al paginii de pornire Data Miner pentru instrucțiuni de utilizare a acestui sistem.
Consultarea statistică este disponibilă prin intermediul Serviciului de consultanță statistică HIMC.
Protocoale
Vă rugăm să consultați pagina noastră de protocoale pentru protocoale de laborator detaliate, precum și scurte descrieri adecvate pentru publicații sau cereri de subvenții.
Informații suplimentare:
- Mass Cytometry Review (Trends in Immunology)
- Analiza datelor CyTOF în FlowJo
.