Scop: Recent, mai multe tehnici de transcripție inversă-PCR s-au dovedit a fi utile pentru detectarea micrometastazelor circulante. Cu toate acestea, în acest mod nu au putut fi detectate clusterele de celule intacte care au fost găsite în experimentele pe animale cu valoare prognostică. În acest studiu, s-a realizat evaluarea și modificarea unei metode comerciale de separare celulară imunomagnetică, bazată pe citokeratină, pentru detectarea clusterelor celulare intacte la pacienții cu carcinom colorectal.
Design experimental: Au fost evaluați 32 de pacienți cu cancer de colon (6 se aflau în stadiul Dukes B, 13 în stadiul C și 13 în stadiul D) și 20 de probe de donatori sănătoși. Separarea celulară imunomagnetică a fost realizată din buffy coat din probele de sânge periferic (20 ml) utilizând Kitul de îmbogățire a celulelor de carcinom (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germania), evitându-se orice etapă de filtrare. Fracția celulară îmbogățită a fost citocentrifugată și marcată imunocitochimic cu ajutorul unui anticorp împotriva pancitokeratinei (MNF116; Dako).
Rezultate: Din 20 de probe sănătoase, 2 conțineau o singură celulă pozitivă la citokeratină. Din 32 de probe unice din cazuri maligne, 24 au prezentat celule citokeratină-pozitive. Grupuri de celule tumorale, dublete de celule mixte (o celulă citokeratină-pozitivă și una negativă) și grupuri de celule mixte au fost detectate la 22 din 24 de pacienți. În șase cazuri, au fost detectate celule de tip dendritic citokeratină-pozitive. Datele de urmărire indică faptul că chimioterapia nu poate distruge toate grupurile de celule tumorale circulante.
Concluzii: Folosind metodele prezentate, am putut detecta celulele canceroase circulante și clusterele celulare la pacienții cu carcinom de colon. Structuri celulare similare au fost descrise anterior numai la șobolani. Datele prezente dovedesc că astfel de structuri sunt prezente și în cancerul colorectal uman.