Imunocitochimie în neoplazia intraepitelială și cancerul invaziv
Pentru a clasifica neoplazia intraepitelială a colului uterin, citopatologii se bazează pe criterii citomorfologice, cum ar fi hipercromasia nucleară, atipia nucleară și raportul nucleocitoplasmatic. Această formă de clasificare nu poate prezice comportamentul biologic al leziunilor CIN. Se dezvoltă o cantitate imensă de markeri biologici sau de biomarkeri de substituție care sunt în mare parte aplicabili pentru țesuturile histologice de col uterin. Acești markeri sunt de obicei prezentați ca fiind „foarte promițători” în prezicerea corectă a comportamentului regresiv sau progresiv al leziunilor cervicale. În practica zilnică, aplicabilitatea acestor markeri este mai degrabă dezamăgitoare. Deoarece primele observații sugerează că CIN implică o disfuncție progresivă a activității proliferative a celulelor epiteliale cervicale, majoritatea markerilor biologici dezvoltați sunt proteine care joacă un rol crucial în căile de reglare a ciclului celular. Ne referim la capitolul 1 pentru o prezentare extinsă a acestor markeri biologici, dotați în special pentru histologia cervicală. În citologia cervicală, alegerea markerilor biologici este, din punct de vedere istoric, mult mai limitată, deoarece screeningul se face cu frotiurile colorate cu Papanicolaou și, de obicei, nu există material de rezervă pentru cercetări suplimentare. Mai mult decât atât, dacă se dorește ca imunocitochimia pe probe citologice umede directe, cum ar fi citologia pe bază de lichid, să aibă succes, este necesară o fixare ușoară și scurtă în alcooli sau acetonă. Numai în laboratoare cu înaltă calificare și bine controlate se poate realiza în mod corespunzător această fixare ușoară, astfel încât să se poată obține rezultate reproductibile de colorare imunocitochimică. Această problemă nu apare în histologie datorită fixării robuste de rutină a țesuturilor în formol.
Dezvoltarea anticorpilor monoclonali (mAb) specifici pentru lanțurile de keratine individuale permite distincția imunocitochimică între celulele de rezervă, metaplazia scuamoasă imatură și matură și epiteliul scuamos ectocervical și endocervical columnar normal, precum și între diferitele tipuri de anomalii epiteliale (gradele CIN 1, 2 și 3).123,228-230
Prin utilizarea mai multor anticorpi monoclonali direcționați împotriva unor epitopi diferiți ai aceluiași polipeptid de keratină (de exemplu, diferiți mAb împotriva keratinei 18), este posibilă detectarea modificărilor structurale rezultate din activitatea biologică sau din transformarea neoplazică. Gradul de diferențiere al unui cancer cu celule scuamoase poate fi determinat prin utilizarea anticorpilor împotriva keratinei 10 sau 13. Keratina 10 este un marker al keratinizării. Ea poate fi exprimată în celulele din straturile mai superficiale ale epiteliului scuamos, chiar și atunci când nu sunt detectabile semne de keratinizare la microscopul optic.
Abs cu reacție încrucișată largă dau reacții pozitive în aproape toate țesuturile epiteliale și în cancerele epiteliale primare și metastatice, inclusiv în carcinoamele cu celule scuamoase de diferite grade de diferențiere și în carcinoamele anaplastice cu celule mici. Anticorpii împotriva keratinei 18 pot, printre altele, să recunoască adenocarcinoamele, dar nu reacționează în mod normal cu carcinoamele cu celule scuamoase.231 Adenocarcinoamele sunt aproape întotdeauna negative pentru keratinele 5, 10, 13 și 16. Carcinoamele cu celule scuamoase sunt aproape întotdeauna pozitive pentru keratinele 5, 10, 10 și 13. Expresia keratinei 16 este limitată la carcinoamele cu celule scuamoase keratinizante. Keratina 7 mAbs în general nu a dat nicio reacție de colorare cu epiteliile scuamoase (keratinizante). Acest anticorp reacționează cu celulele columnare din colul uterin.232
Moll și colaboratorii au arătat prezența citokeratinelor 5, 7, 8, 17, 18 și 19 în metaplazia scuamoasă imatură și un model modificat de exprimare a keratinei în epiteliul scuamos matur și în displazia ușoară233 (Fig. 8.125). Ei au găsit un model similar în carcinomul invaziv ca și în epiteliul scuamos matur.
Smedts și colaboratorii, în epiteliul cervical anormal, au constatat că citokeratinele 10, 11, 13 și 16 sunt distribuite neregulat în CIN de gradul 3.234,235 Ei au observat un model peticit de distribuție a pozitivității. Zonele de pozitivitate au alternat cu zone negative. Aceștia nu au putut demonstra o schimbare consistentă și progresivă a conținutului de citokeratină de la epiteliul normal până la gradele CIN 1 și 2. Observațiile lor sugerează că a avut loc o schimbare bruscă în momentul apariției leziunii descrise morfologic ca fiind de gradul 3 CIN. Leziunile CIN de gradul 2 din invaginațiile canalului endocervical au avut un model identic cu leziunile de la suprafața canalului. Modelul de colorație în CIN grad 3 a fost comparabil cu cel întâlnit în carcinomul cu celule scuamoase invaziv. Puts și asociații au folosit anticorpi anticitokeratină împotriva keratinelor și nu au găsit diferențe calitative în reacțiile de colorare între leziunile epiteliale de diferite grade de severitate.236 Ei au găsit un număr variabil de celule Langerhans în 32 de leziuni displazice, dar niciun model specific de distribuție între leziunile de diferite grade de severitate.6 Ei au speculat că diferențele în ceea ce privește numărul de celule Langerhans ar putea fi corelate cu diferențele în procesele displastice, precum și cu diferențele în răspunsul gazdei și, astfel, ar putea fi, potențial, un indicator al unei tendințe de regresie sau progresie.
Smedts și colaboratorii au investigat expresia keratinelor în epiteliile cervicale normale, epiteliul metaplastic și CIN gradele 1, 2 și 3 cu un panel de lanțuri mAbs specifice.237,238 Acest lucru a permis detectarea keratinelor individuale 4, 5, 7, 7, 8, 8, 10, 13, 14, 18 și 19 la nivelul unei singure celule. Rezultatele au arătat că, în timpul transformării celulelor de rezervă în metaplazie scuamoasă imatură, acest epiteliu a dobândit keratine tipice epiteliului scuamos ectocervical, în timp ce keratinele tipice celulelor de rezervă și celulelor columnare s-au pierdut. Această schimbare a continuat în timpul diferențierii ulterioare în metaplazia scuamoasă matură. Transformarea premalignă a dus la o pierdere parțială a keratinelor tipice epiteliului scuamos și la dobândirea keratinelor atipice epiteliilor simple.
În cursul creșterii atipiei epiteliale prin gradele 1 până la 3 de neoplazie intraepitelială, keratinele caracteristice epiteliilor simple apar în leziunile displastice (Fig. 8.126). În CIN de gradul 1, aproximativ jumătate și în CIN de gradul 2 (displazie moderată) o treime din cazuri prezintă o anumită pozitivitate dispersată pentru keratinele 8 și 18, în timp ce keratina 19, care în epiteliul scuamos matur colorează straturile bazale, prezintă acum o pierdere de polaritate și colorează o parte din ce în ce mai mare din întreaga grosime a epiteliului displazic, adesea într-un model neregulat.
În comparație cu epiteliul scuamos matur, expresia keratinelor 4, 5, 13 și 14 a scăzut, iar modelul de colorație a devenit variabil (figurile 8.127 și 8.128). Acest lucru a indicat faptul că epiteliul displastic legat de progresia severității anomaliei și-a pierdut progresiv fenotipul de cheratină scuamoasă și a dobândit caracteristici de cheratină de epiteliu simplu.
Aceste modificări au fost și mai evidente în cazurile de CIN de gradul 3; în toate cazurile, expresia cheratinelor 8 și 18 a fost abundentă, iar expresia cheratinelor 13 și 14 a scăzut, în unele zone devenind complet absentă. Acest lucru a evidențiat expresia crescută a unui model de keratină caracteristic epiteliului simplu cu modificări displastice în creștere.
Keratinele 8, 18 și 19 au fost găsite în carcinoamele cervicale cu celule scuamoase, precum și în adenocarcinom. Expresia acestor keratine în celulele de rezervă ar putea indica faptul că aceste celule sunt celule progenitoare comune cu un potențial dublu de diferențiere, pe de o parte printr-o fază de metaplazie în anomalii epiteliale scuamoase și, pe de altă parte, prin diferențiere într-o anomalie de tip celular columnar. Expresia duală a keratinelor de tip celule scuamoase și de tip celule columnare în metaplazia scuamoasă imatură pare să susțină această ipoteză.228,229
.