Discuție
O varietate de tehnici de bloc celular au fost folosite de peste un secol. Utilizarea blocurilor celulare a fost susținută pe scară largă în diagnosticarea pacienților cu mase care se pretează la FNA, deoarece acestea oferă informații arhitecturale de diagnostic care completează frotiurile FNA.
În acest studiu, frotiul FNA colorat cu Papanicolau a fost cea mai bună metodă pentru diagnosticele de rutină, datorită conservării superioare a caracteristicilor nucleare și citoplasmatice, în timp ce tehnica blocului celular a fost mai potrivită pentru analizele imunocitochimice. Constatările noastre ar sugera că probele din blocul celular sunt cel mai bine utilizate ca un adjuvant pentru ICC și nu pentru diagnostice citologice primare. Degenerarea celulelor din probele de bloc celular poate fi atribuită unei întârzieri în scufundarea specimenului de bloc celular în fixator imediat după recoltare și variației în tehnica FNA în rândul personalului. Este posibil ca această variație în tehnică să fi contribuit fie la succesul, fie la eșecul obținerii unor eșantioane de blocuri celulare adecvate, care depinde în mare măsură de îndemânarea aspiratorului și de celularitatea ridicată a aspiratului.
Datorită întârzierii de prefixare a multor eșantioane de blocuri celulare, s-a observat o conservare suboptimă a celularității (23/47), morfologiei (41/47) și arhitecturii (28/47) la începutul studiului. În consecință, a existat o concordanță slabă și o diferență semnificativă din punct de vedere statistic între metode în ceea ce privește evaluarea celularității (κ – statistic = -0,0022; P 0,0006), a conservării morfologice (κ – statistic = -0,02; P 0,00) și a conservării arhitecturale (κ – statistic = 0,00; P 0,00). Nu a existat nicio probă FNA (0/47) care a obținut scorul zero pentru celularitate, dar 8,5% (4/47) din probele de blocuri celulare au fost acelulare. Dintre aceste probe, 4 % (2/47) au fost obținute prin clătirea acului și a butucului seringii și 4 % au fost obținute prin efectuarea unei singure aspirații dedicate pentru proba de bloc celular. Celularitatea scăzută (scor 1) a fost obținută pentru 40% (19/47) din probele de bloc celular, în timp ce cea a probelor FNA a fost de numai 11% (5/47). De remarcat, de asemenea, că mai multe (96%) probe FNA (45/47) au prezentat un scor mai mare (scor 2 și 3) pentru celularitate decât probele de bloc celular, 57% (27/47). Toate probele FNA (47/47) au prezentat conservarea arhitecturală în comparație cu doar 47% (22/47) din probele de blocuri de celule. În majoritatea eșantioanelor de blocuri celulare (53%), conservarea arhitecturală a fost absentă. Cu toate acestea, s-a decis să se continue utilizarea fixativului Formal-Fixx, deoarece restul eșantioanelor (24/47, 6/47 și, respectiv, 19/47) au prezentat o conservare optimă, ilustrată prin scoruri de clasificare mai mari. Hanley et al. au afirmat că păstrarea antigenecității celulelor tumorale este esențială pentru analize imunocitochimice precise, iar utilizarea unui fixator ideal și a unor parametri optimi de procesare a țesuturilor este crucială în această privință. Deoarece conservarea optimă a fost observată în restul eșantioanelor de blocuri de celule, fixatorul și programul de prelucrare a țesuturilor utilizate au fost considerate adecvate. Conservarea suboptimală observată s-ar fi putut datora decalajului de timp de prefixare.
În mediul nostru, FNA-urile sunt efectuate predominant de către registratori de radiologie și patologie a căror experiență și abilitate variază. În consecință, materialul pentru blocul celular a fost aspirat, de obicei, după 3 sau 4 aspirații pentru frotiul FNA convențional, căruia i s-a acordat prioritate. Este posibil ca acest lucru să fi contribuit la un specimen mai traumatizat și mai slab conservat. În multe cazuri (20/47), nu s-a efectuat o trecere dedicată pentru probele de bloc celular. Seringa care conținea proba FNA reziduală a fost pur și simplu clătită în soluția de fixare a blocului celular. În aceste cazuri, 65% (13/20) au avut o celularitate suboptimală (scor 0 și 1). În cazul a 30/47 de probe de bloc celular, o aspirație cu ac dedicat a fost plasată direct în flaconul care conținea fixatorul Formal-Fixx de la Shandon și 60% (18/30) au prezentat o celularitate adecvată (scor 2 și 3). Acest lucru demonstrează că o aspirație cu ac dedicat pentru blocul celular îmbunătățește randamentul.
Inferența trasă de Bardi și Schwartz indică faptul că mentalitatea atât a pacienților, cât și a aspiratorilor este la fel de importantă. Unii pacienți nu și-au dat consimțământul pentru o aspirație suplimentară cu ac pentru proba de bloc celular, în timp ce mulți aspiratori au fost reticenți în a efectua aspirații suplimentare cu ac în ciuda consimțământului informat al pacienților. Acest lucru s-a datorat fie faptului că pacientul nu a putut suporta procedura, fie riscului de a provoca un pneumotorax la pacienții supuși unei FNA pulmonare, fie faptului că masa nu se pretează la FNA, fie din cauza constrângerilor de timp, a lipsei de experiență sau pur și simplu pentru că nu erau dispuși să facă acest lucru. Deși nu este evident din punct de vedere statistic, este posibil ca probele recoltate pentru tehnica blocului celular să fi fost dezavantajate prin faptul că nu au beneficiat de o aspirație dedicată. Toate cele de mai sus ar fi putut contribui la slaba conservare celulară, morfologică și arhitecturală a blocurilor celulare și la o concordanță slabă între cele două metode de pregătire a probelor.
A existat o concordanță slabă în ceea ce privește imunomarcajul CK7, care a fost singurul test care a prezentat o diferență semnificativă din punct de vedere statistic (P 0,02) între metode. CK7 a fost efectuată pe 44 de probe. Dintre acestea, 34% (15/44) au fost negative în proba de bloc celular și 13,6% (6/44) în probele FNA. În evaluarea fondului (BG) / colorației nespecifice în imunostamine, s-a obținut o diferență semnificativă din punct de vedere statistic în această discordanță pentru CK 7 (K 0,03; valoare P 0,0001), CK20 (K 0,01; valoare P 0,00), TTF1 (K 0,00; valoare P 0,03) și imunostaminele sinaptofizină (K 0,15; valoare P 0,03). În toate cazurile, mai multe probe de blocuri celulare nu au prezentat nicio colorare de fond (scor 0) decât probele FNA. Colorarea aberantă nespecifică nu a fost observată în controalele negative ale blocurilor celulare corespunzătoare și în imunostaminele AE 1/3 împerecheate. O posibilă explicație pentru acest fenomen este că nu toți antigenii sunt susceptibili la degradarea anoxică sau la difuzie, la fel cum nu toți antigenii sunt afectați în mod egal de fixare. Probele de FNA cele mai afectate de colorarea de fond și de colorarea anormală au fost unele probe de FNA din ficat, probe care conțineau resturi proteice și probe predominant necrotice sau probe cu o grosime foarte mare, ceea ce indică faptul că problema era intrinsecă. Kung et al. au făcut o observație similară în ceea ce privește intensitatea mai puternică a colorației, lipsa colorației nespecifice și lipsa colorației aberante în probele de blocuri celulare, în special cu colorații de citokeratină.
S-au obținut rezultate discordante pentru o probă- un FNA hepatic. Imunocitochimia efectuată pe acest frotiu a demonstrat pozitivitatea celulelor tumorale pentru CK7 și sinaptofizină, în timp ce CK20 a fost negativ. Acest profil de citokeratină este observat în 56% din carcinoamele neuroendocrine ale plămânilor. Același panel de teste efectuat pe eșantionul de bloc celular corespunzător a fost negativ. Deși toate cele 3 teste au fost repetate, rezultatele au rămas neschimbate. O posibilă explicație ar putea fi conservarea suboptimală a antigenecității celulelor tumorale din această probă, care a fost cumva făcută mai sensibilă decât altele.
Cercetarea viitoare în acest departament ar beneficia de explorarea utilizării formalinei tamponate neutre (NBF) de 10% ca fixator de elecție în pregătirea probelor de blocuri de celule pentru imunohistochimie (IHC), cu o scădere a intervalului de timp dintre recoltarea probei și fixare. Un comitet ad-hoc pentru standardizarea imunohistochimiei, afiliat la Colegiul Patologilor Americani, a descurajat utilizarea de fixatori care nu sunt pe bază de formalină sau de metodologii alternative de fixare. Acest lucru se datorează faptului că datele de performanță ale testului IHC care utilizează alți fixatori sunt limitate, iar extrapolarea din datele existente nu este fiabilă. Axe et al. au produs blocuri de celule din FNA de ficat care au fost fixate în 10% NBF cu o conservare optimă a celularității și IHC reușită, permițând astfel subclasificarea tumorii.
Cu utilizarea sistemului de pregătire a blocurilor de celule Shandon Cytoblock Cell Block Preparation System a fost posibilă capturarea unor grupuri mici de celule. O tehnică îmbunătățită de pregătire a blocului celular și de capturare a celulelor a fost concepută de Varsegi și Shidham, care ar putea fi benefică încorporată în metoda actuală. Utilizarea tehnicii Varsegi sporește șansele de a captura celulele împrăștiate individual cu ajutorul Histogel (Thermo Shandon), evitând astfel ca histotehnologul să taie prea adânc în bloc și să riște să rateze zona cu celulele de interes. Deși nu este evident din punct de vedere statistic, este posibil ca probele colectate pentru tehnica blocului celular să fi fost dezavantajate prin faptul că nu au primit o aspirație inițială dedicată, ceea ce ar fi putut compromite celularitatea. În acest sens, ar trebui explorată obținerea de material din mai multe aspirații cu ac dedicate pentru blocul celular pentru a îmbunătăți randamentul.
Rolul pregătirii blocului celular în citopatologia diagnostică este, fără îndoială, de o importanță imensă, deoarece permite multiple investigații speciale și, în consecință, un diagnostic citologic mai rafinat. Metodologia ar putea fi îmbunătățită prin modificarea tehnicilor și reducerea limitărilor puse în acest studiu, și anume: explorarea utilizării formalinei tamponate neutre (NBF) de 10% ca fixator de elecție în pregătirea probelor de blocuri celulare pentru imunohistochimie (IHC), cu o scădere a intervalului de timp dintre recoltarea probei și fixare și standardizarea tehnicii FNA în rândul personalului. Frotiurile FNA directe și blocurile celulare se completează reciproc, iar rezultatele noastre indică faptul că ambele sunt necesare în diagnosticarea pacienților; primele pentru evaluarea morfologiei, iar cele din urmă pentru rezultate imunocitochimice optime. În mediile cu resurse limitate, implicațiile de cost ale efectuării atât a frotiurilor convenționale, cât și a celor blocate pe tot materialul FNA justifică o evaluare suplimentară.
.