Rolul anti-catabolic al lactoferricinei bovine în cartilaj

Lactoferricina bovină (LfcinB) este o peptidă multifuncțională derivată din lactoferrina bovină care demonstrează activități antibacteriene, antifungice, antivirale, antitumorale și imunomodulatoare. Recent, studiile s-au concentrat asupra potențialului anti-catabolic și antiinflamator al LfcinB. LfcinB este capabil să moduleze efectele citokinelor, cum ar fi IL-1 și factorul de creștere a fibroblastelor 2, precum și să promoveze factori anabolizanți specifici cartilajului. Aceste proprietăți sunt deosebit de importante în menținerea homeostaziei cartilajului și în prevenirea unei stări catabolice, care duce la patologie clinică. Această trecere în revistă se concentrează asupra literaturii recente care elucidează rolul LfcinB în prevenirea degradării cartilajului.

Introducere

Boli degenerative ale cartilajului, cum ar fi osteoartrita (OA) la nivelul articulațiilor și discopatia degenerativă (DDD) la nivelul coloanei vertebrale, sunt boli prevalente care imprimă un impact semnificativ asupra societății actuale. OA este principala cauză de invaliditate în rândul populației vârstnice (1), iar DDD contribuie la natura debilitantă a durerilor cronice de spate (2-4). În prezent, patogeneza acestor două afecțiuni este în mare parte necunoscută, dar ambele implică deteriorarea și degradarea progresivă a țesutului cartilaginos. Literatura recentă s-a concentrat pe înțelegerea multora dintre procesele fiziopatologice implicate în degradarea cartilajului, cu intenția de a dezvolta noi terapii menite să încetinească și/sau să inverseze aceste boli.

În condiții normale, atât condrocitele articulare, cât și celulele discului intervertebral (IVD) mențin un echilibru dinamic între sinteza și degradarea componentelor matricei extracelulare (ECM) (5, 6). În stările degenerative, există o întrerupere a echilibrului matricei, ceea ce duce la pierderea progresivă a țesutului cartilaginos, la suprimarea producției de proteoglicani (PG) și la expansiunea clonală a celulelor în regiunile epuizate. Metabolismul condrocitelor este dezechilibrat din cauza producției excesive de mediatori catabolici, inclusiv metaloproteaze matriciale (MMP), aggrecanaze (ADAMTS) și alte citokine și factori de creștere eliberați de condrocite care ajută la distrugerea ECM (7-9). Prin urmare, identificarea unor noi factori de creștere sau mediatori care suprimă din punct de vedere biochimic căile catabolice și/sau anti-anabolice implicate în degradarea cartilajului poate schimba homeostazia spre o stare pro-anabolică, servind potențial ca o strategie terapeutică pentru a încetini atât OA, cât și DDD.

În mod interesant, mai multe studii recente au evidențiat potențialul glicoproteinei lactofericină bovină (LfcinB) și al precursorului acesteia, lactoferrina bovină (bLf), de a induce efecte anti-catabolice, pro-anabolice și antiinflamatorii în cartilaj. Identificată pentru prima dată în laptele bovin în 1939 (10), bLf este o glicoproteină de 80 kDa care se găsește în secrețiile mucoaselor, în fluidele sinoviale, în plasmă și în granulele neutrofile (11) și joacă un rol-cheie în diverse căi antibacteriene, antivirale, anticancerigene și antiinflamatorii (12). Recent, s-a constatat că bLF oferă valoare terapeutică în etiologiile musculo-scheletice. De exemplu, administrarea orală de bLF într-un model de artrită adjuvantă la șobolani a suprimat dezvoltarea artritei și a hiperalgeziei (13), sugerând proprietățile sale anti-catabolice și antiinflamatorii în articulațiile sinoviale. Aceste rezultate sunt coroborate de alte constatări în care injecțiile periarticulare de LF uman au suprimat inflamația locală într-un model de artrită septică murină (14).

LfcinB se formează prin scindarea mediată de pepsină a glicoproteinei bLf, un membru cheie al familiei de transferrine. LfcinB a fost recuperată din conținutul gastric acid al oamenilor în urma digerării bLf (15). La fel ca bLF, LfcinB exercită o varietate de efecte în mai multe țesuturi și organisme diferite. Efectele antibacteriene ale LfcinB au fost deja bine documentate. Atunci când este eliberată din proteina sa mamă, LfcinB se transformă dintr-o structură α-helicoidală într-o structură β-hairpin amfipatică, permițând peptidei să se lege de membranele bacteriene cu o mare afinitate (16). Odată legată, LfcinB crește permeabilitatea membranei celulare, declanșând astfel un efect bactericid (17). Studiile efectuate în alte sisteme biologice relevă, de asemenea, efecte antifungice, antiparazitare, antivirale, antitumorale și imunomodulatoare mediate de LfcinB (17-19), la fel ca bLf. Având în vedere asemănările lor structurale, aceste constatări sugerează că, cel mai probabil, extremitatea N hidrofobă de bază a bLf (care conține reziduurile LfcinB) este cea care explică aceste efecte comune (20).

Această trecere în revistă se va concentra pe efectele puternice anti-catabolice și antiinflamatorii ale LfcinB atât în cartilajul articular, cât și în IVD, care evidențiază potențialul său ca agent terapeutic pentru OA și DDD în viitor.

Lactoferricina în cartilajul articular

Homeostazia cartilajului este menținută printr-un echilibru delicat între căile catabolice și cele anabolice. Atunci când acest echilibru este perturbat, căile catabolice predomină adesea și induc degenerarea cartilajului, manifestată clinic prin OA. Efectul LfcinB asupra căilor catabolice asociate cu degradarea cartilajului a fost investigat pentru prima dată de Yan și colab. (21). În studiul lor, cartilajul articular uman și sinoviala au fost cultivate cu IL-1β și cu factorul de creștere a fibroblastelor 2 (FGF-2) (două molecule cunoscute pentru a conduce catabolismul în cartilajul articular), cu sau fără LfcinB. Aceștia au demonstrat că LfcinB inhibă puternic efectele catabolice atât ale IL-1β, cât și ale FGF-2. În special, în condrocitele articulare umane și fibroblastele sinoviale tratate cu IL-1β și FGF-2, expresia enzimelor de degradare a matricei (adică MMP-1, MMP-3 și MMP-13) și a ADAMTS (adică ADAMTS4 și ADAMTS5) a fost redusă atât la nivelul ARNm, cât și la nivelul proteinelor în prezența LfcinB. Această constatare este semnificativă, deoarece s-a demonstrat că MMPs și ADAMTSs contribuie la degradarea cartilajului (22), iar găsirea unor modalități de diminuare a activităților lor a fost în centrul mai multor studii (23, 24).

Yan și colegii au elucidat, de asemenea, că LfcinB poate interfera cu activitățile catabolice ale FGF-2 (cunoscut și sub numele de FGF de bază) prin legarea potențială la heparan sulfat proteoglicani (HSPGs), cum ar fi syndecan 4 (21). Sindecan 4 a facilitat legarea FGF-2 la receptorul FGF de pe suprafața celulară. Capacitatea LfcinB de a se lega de syndecan a fost descrisă anterior. Mader și colab. (25) au descoperit că LfcinB se leagă de syndecan, împiedicând legarea FGF-2 și a factorului de creștere endotelială vasculară (VGEF) în celulele endoteliale venoase ombilicale umane și de șoareci. S-a propus ca un mecanism similar să fie prezent în celulele cartilajului articular (21). LfcinB se leagă în mod competitiv de syndecan și împiedică FGF-2 să se lege de receptorul său celular articular, împiedicând astfel cascadele de semnalizare catabolică și/sau anti-anabolică din aval (21).

Pe lângă suprimarea mediatorilor catabolici, LfcinB inhibă, de asemenea, mediatorii inflamatori în cartilajul articular (21). În cartilajul articular, LfcinB a scăzut expresia mai multor gene proinflamatorii, cum ar fi IL-6 și receptorul Toll-like 2 (TLR-2). IL-6 poate incita degenerarea cartilajului prin mecanisme autocrine și paracrine, iar TLR-2 incită un răspuns imunitar înnăscut și inflamație în articulațiile OA (26, 27). Mai mult, LfcinB a crescut, de asemenea, citokinele antiinflamatorii, inclusiv IL-4 și IL-10 (21). Prin modularea simultană a activităților proinflamatorii și antiinflamatorii, LfcinB a provocat o reducere generală a inflamației în OA.

Într-un studiu de urmărire, Yan et al. (28) au caracterizat în continuare căile de semnalizare utilizate de LfcinB și au descoperit încă un mediator anti-catabolic crescut în prezența LfcinB (28), inhibitorul tisular al metaloproteinazei 3 (TIMP-3). Această constatare este semnificativă, în sensul că TIMP-3, spre deosebire de ceilalți membri ai familiei TIMP (TIMP-1-4), este un inhibitor puternic cu un spectru de substrat relevant în biologia cartilajului, inclusiv MT-MMPs, ADAMTS4, ADAMTS5 și convertaza factorului de necroză tumorală (29, 30). Având în vedere că TIMP-3 este singurul inhibitor endogen al ADAMTS (31), acest lucru poate explica de ce LfcinB a fost capabil să blocheze epuizarea PG de către IL-1β și FGF-2 ex vivo (19).

Deși multe dintre căile de semnalizare din aval mediate de LfcinB rămân în mare parte necunoscute, studii recente au început să descopere cascadele specifice stimulate de LfcinB în cartilajul articular uman. Prin inhibarea farmacologică a căilor ERK, Akt și p38, Yan et al. (28) au determinat că calea ERK-1/2 a mediat majoritatea aspectelor efectelor LfcinB în condrocitele articulare. Mai mult, studiile mecaniciste privind transcrierea TIMP-3 indusă de LfcinB au scos la iveală un rol esențial al factorului de transcripție Sp1 (32, 33). Sp1 aparține mașinăriei transcripționale de bază în timpul inducției TIMP-3, deoarece eliminarea Sp1 abrogă expresia TIMP-3 indusă de LfcinB (32). Interesant, Sp1 a fost, de asemenea, esențial pentru producția de TIMP-3 mediată de TGF-β (33), sugerând că acest program de transcripție poate fi activat de diferite intrări de semnalizare.

Într-un studiu încă nepublicat, Yan et al. demonstrează în continuare că citokina antiinflamatoare IL-11 a fost crescută în mod dramatic de LfcinB. Această creștere a IL-11 a fost rezultatul activării căii ERK-1/2, care a activat ulterior heterodimerul c-Fos/JunD pentru a iniția transcrierea. IL-11 indusă a stimulat apoi cascadele antiinflamatorii, precum și anti-catabolice prin inducerea TIMP-1 într-o manieră dependentă de Stat3.

Pe baza acestor studii, presupunem că LfcinB promovează activitățile antiinflamatorii și anti-catabolice prin intermediul a trei mecanisme (Figura 1): (i) legarea competitivă a LfcinB la HSPGs, împiedicând astfel o semnalizare eficientă a IL-1 și FGF-2; (ii) inducerea TIMP-3 pentru a limita activitățile proteolitice endogene; și (iii) inducerea de citokine protectoare, în special IL-11, care promovează antiinflamarea și anti-catabolismul. Deși aceste studii au pus bazele pentru înțelegerea rolului LfcinB în cartilajul articular, sunt necesare studii suplimentare pentru a diseca căile exacte și genele țintă reglementate de LfcinB.

Lactoferricina în celulele IVD

Un alt domeniu în care LfcinB s-a dovedit a fi foarte promițător ca o potențială opțiune terapeutică a fost în degenerarea nucleului pulpos (NP) al IVD. La fel ca în cazul cartilajului articular, menținerea homeostaziei țesutului NP se bazează pe un echilibru între procesele anabolice și catabolice. Atunci când acest echilibru este alterat, se inițiază degenerarea IVD, care poate culmina cu dureri cronice de spate pentru pacient.

Kim et al. (34) au examinat efectele LfcinB asupra IVD din țesutul bovin, precum și din cel uman. Aceștia au demonstrat că adăugarea de LfcinB la o cultură de celule NP a dus la o creștere a sintezei PG. Unul dintre mecanismele prin care LfcinB a crescut sinteza de PG a fost prin reglarea ascendentă a SOX-9. SOX-9 este un factor de transcripție cheie care a demonstrat că mărește expresia de aggrecan și colagen de tip II în celulele NP bovine (35, 36). Celulele cultivate cu LfcinB au concentrații de aproape 2,5-3,0 ori mai mari de SOX-9, în funcție de doza de LfcinB, în comparație cu cele fără LfcinB, demonstrând capacitatea sa de a promova căile anabolice în țesutul NP de bovine (34). În plus față de promovarea SOX-9, există dovezi de suprimare a enzimelor cheie de degradare a cartilajului, inclusiv MMP-1, MMP-13 și ADAMTS5. Această suprimare a fost completată de promovarea mai multor TIMP-uri, inclusiv TIMP-1, TIMP-2 și TIMP-3, consolidând și mai mult rolul anti-catabolic al LfcinB (34). În cele din urmă, au fost elucidate căile de semnalizare prin care LfcinB își exercită efectele anabolice. A fost evaluată activarea subgrupurilor de proteină kinază activată de mitogen (MAPK) (ERK, p38 și JNK) și doar căile ERK și p38 sunt activate de prezența LfcinB, în timp ce calea JNK nu a fost activată la niciun moment (34). Gradul de implicare a fiecărei căi activate a fost evaluat cu ajutorul unor inhibitori farmacologici specifici. Inhibarea căii p38 duce la o scădere semnificativă a inducerii genei aggrecan până sub nivelul grupului de control. Inhibarea căii ERK a condus, de asemenea, la o scădere a inducerii aggrecanului, dar nu în aceeași măsură cu inhibarea p38 (34).

Ellman și colab. (37) au investigat în continuare calea de semnalizare prin care acționează LfcinB și au identificat o relație sinergică între LfcinB și un alt mediator anabolic: proteina morfogenetică osoasă 7 (BMP-7). În studiul lor, tratamentul celulelor IVD bovine cu o combinație de LfcinB și BMP-7 a dus la o creștere mai mare a acumulării și sintezei PG, precum și la inducerea genei aggrecan. Aceștia au propus că mecanismul sinergic a fost rezultatul activării comune a SMAD-1/5/8 atât de către BMP-7, cât și de către LfcinB (38, 39). De asemenea, LfcinB a redus SMAD-6 (un inhibitor puternic al SMAD-1/5/8), precum și Noggin (un inhibitor al BMP-7) (37). Scăderea acestor factori inhibitori permite ca LfcinB să elimine feedback-ul negativ asupra BMP-7 și să permită o contribuție anabolică maximă din partea BMP-7. Autorii au concluzionat că această combinație ar putea fi potențial utilizată clinic în prevenirea și tratamentul degenerării IVD (37).

O altă perspectivă asupra naturii antiinflamatorii a LfcinB în IVD este oferită de un studiu de urmărire realizat de Kim și colab. (40). Acest studiu s-a axat în principal pe interacțiunea LfcinB cu mediatorii inflamatori IL-1 și endotoxina lipopolizaharidă (LPS). Atât IL-1, cât și LPS s-au dovedit a fi mediatori inflamatori puternici care conduc la degenerarea celulelor IVD (41, 42). Prin experimentele lor, Kim și colab. (40) au demonstrat că LfcinB induce o creștere a formării matricei pericelulare atunci când este adăugat la culturile de IVD bovine. Acest efect anabolic a fost atât de puternic încât adăugarea LfcinB a salvat formarea suprimată a matricei pericelulare în prezența IL-1 și LPS. Adăugarea de LfcinB a suprimat, de asemenea, producția de MMP-1, MMP-3, MMP-13 și ADAMTS-5 mediată de IL-1 și LPS, care s-au dovedit a fi implicate în degenerarea discului. În cele din urmă, adăugarea de LfcinB la culturile IVD care conțin IL-1 și LPS a dus la atenuarea creșterii TLR-2 și TLR-4. TLR-2 și TLR-4 au funcții de reglementare importante în căile inflamatorii și oxidative care duc la degenerarea IVD (27, 43). Capacitatea de a suprima expresia TLR-urilor, precum și a celorlalți mediatori catabolici, demonstrează potențialul puternic anti-catabolic al LfcinB în IVD.

Kim și colab. (40) au investigat, de asemenea, potențialul terapeutic al LfcinB prin examinarea culturilor de organe ex vivo ale IVD de iepuri și șoareci albi din Noua Zeelandă. Înainte de cultură, discurile au fost injectate în bloc cu LfcinB (200 μg per disc de iepure și 100 μg per disc de șoarece). Discurile LfcinB și discurile de control fără injecții de LfcinB au fost cultivate în mediu care conținea IL-1, LPS sau niciunul dintre acestea. Discurile fără injecția de LfcinB au prezentat o diminuare semnificativă a PG în prezența IL-1 și LPS, precum și o scădere a celularității în matricea pericelulară. Discurile injectate cu LfcinB au demonstrat o atenuare a efectului IL-1 și LPS. Această constatare este semnificativă în demonstrarea potențialului LfcinB de a fi un agent terapeutic împotriva activării catabolice a IL-1 și LPS în IVD.

Concluzie

Lactoferricina este o moleculă care s-a dovedit a avea funcții multiple în diferite sisteme biologice. Rolul său în sistemul musculo-scheletic abia acum începe să fie elucidat. În special, proprietățile antiinflamatorii și anticatabolice ale LfcinB o fac o opțiune atractivă în tratamentul DDD și al degenerării IVD. Ambele procese patologice sunt rezultatul unor puternici mediatori inflamatori și catabolici care schimbă echilibrul homeostatic spre catabolism. Sunt necesare studii suplimentare pentru a elucida mecanismele și căile exacte activate de LfcinB; cu toate acestea, potențialul LfcinB ca opțiune terapeutică în OA și DDD este foarte promițător.

1. Buckwalter JA, Saltzman C, Brown T. Impactul osteoartritei: implicații pentru cercetare. Clin Orthop Relat Res 2004; 427: S6-15. Căutare în Google Scholar

2. Buckwalter JA. Îmbătrânirea și degenerarea discului intervertebral uman. Spine 1995; 20: 1307-14. Căutare în Google Scholar

3. Andersson GB. Caracteristici epidemiologice ale durerii lombare cronice. Lancet 1999; 354: 581-5. Căutare în Google Scholar

4. Freemont TJ, LeMaitre C, Watkins A, Hoyland JA. Degenerarea discurilor intervertebrale: înțelegerea actuală a evenimentelor celulare și moleculare și implicațiile pentru terapii noi. Expert Rev Mol Med 2001; 3: 1-10. Căutare în Google Scholar

5. Goldring MB. Rolul condrocitului în osteoartrită. Arthritis Rheum 2000; 43: 1916-26. Căutare în Google Scholar

6. Masuda K, Imai Y, Okuma M, Muehleman C, Nakagawa K, Akeda K, Thonar E, Andersson G, An HS. Injectarea proteinei osteogenice-1 într-un disc degenerat induce restabilirea înălțimii discului și modificări structurale în modelul de puncție anulară la iepure. Spine 2006; 31: 742-54. Căutare în Google Scholar

7. Im HJ, Li X, Muddasani P, Kim GH, Davis F, Rangan J, Forsyth CB, Ellman M, Thonar EJ. Factorul de creștere a fibroblastelor de bază accelerează degradarea matricei prin intermediul unei căi neuro-endocrine în condrocitele articulare umane adulte. J Cell Physiol 2007; 215; 452-63. Căutare în Google Scholar

8. Im HJ, Muddasani P, Natarajan V, Schmid TM, Block JA, Davis F, van Wijnen AJ, Loeser RF. Factorul de creștere a fibroblastelor de bază stimulează matricea metaloproteinazei-13 prin interacțiunea moleculară încrucișată între căile protein-kinazei activate de mitogen și protein-kinazei Cdelta în condrocitele articulare umane adulte. J Biol Chem 2007; 282: 11110-21. Căutare în Google Scholar

9. Muddasani P, Norman JC, Ellman M, van Wijnen AJ, Im HJ. Factorul de creștere a fibroblastelor de bază activează căile MAPK și NFkappaB care converg pe Elk-1 pentru a controla producția de metaloproteinază-13 a matricei de către condrocitele articulare umane adulte. J Biol Chem 2007; 282: 31409-21. Căutați în Google Scholar

10. Sorensen M, Sorensen SPL. Proteinele din zer. C R Trav Lab Carlsberg 1939; 23: 55-99. Căutare în Google Scholar

11. Bennett RM, Kokocinski T. Conținutul de lactoferină al celulelor sanguine periferice. Br J Haematol 1978; 39: 509-21. Căutare în Google Scholar

12. Ward PP, Paz E, Paz E, Conneely OM. Rolurile multifuncționale ale lactoferrinei: o prezentare critică. Cell Mol Life Sci 2005; 62: 2540-8. Căutare în Google Scholar

13. Hayashida K, Kaneko T, Takeuchi T, Shimizu H, Ando K, Harada E. Administrarea orală de lactoferrină inhibă inflamația și nocicepția în artrita indusă de adjuvant la șobolani. J Vet Med Sci 2004; 66: 149-54. Căutare în Google Scholar

14. Guillen C, McInnes IB, Vaughan D, Speekenbrink AB, Brock JH. Efectele administrării locale de lactoferină asupra inflamației în artrita autoimună și infecțioasă murină. Arthritis Rheum 2000; 43: 2073-80. Căutare în Google Scholar

15. Kuwata H, Yip TT, Yip CL, Tomita M, Hutchens TW. Detectarea directă și determinarea cantitativă a lactoferricinei bovine și a fragmentelor de lactoferrină în conținutul gastric uman prin spectrometrie de masă de afinitate. Adv Exp Med Biol 1998; 443: 23-32. Căutare în Google Scholar

16. Hwang PM, Zhou N, Shan X, Arrowsmith CH, Vogel HJ. Structura tridimensională în soluție a lactoferricinei B, o peptidă antimicrobiană derivată din lactoferrina bovină. Biochimie 1998; 37: 4288-98. Căutare în Google Scholar

17. Gifford JL, Hunter HN, Vogel HJ. Lactoferricina: o peptidă derivată din lactoferrină cu proprietăți antimicrobiene, antivirale, antitumorale și imunologice. Cell Mol Life Sci 2005; 62: 2588-98. Căutare în Google Scholar

18. Mader JS, Richardson A, Salsman J, Top D, de Antueno R, Duncan R, Hoskin DW. Lactoferricina bovină provoacă apoptoză în celulele Jurkat T-leucemie prin permeabilizarea secvențială a membranei celulare și direcționarea mitocondriilor. Exp Cell Res 2007; 313: 2634-50. Căutare în Google Scholar

19. Zhang JX, Zhang SF, Wang TD, Guo XJ, Hu RL. Expresia glandei mamare a genelor peptidelor antibacteriene pentru a inhiba agenții patogeni bacterieni care provoacă mastită. J Dairy Sci 2007; 90: 5218-25. Căutare în Google Scholar

20. Kang JH, Lee MK, Kim KL, Hahm KS. Relații structură-activitate biologică a segmentului peptidic înalt bazic de 11 reziduuri al lactoferrinei bovine. Int J Pept Protein Res 1996; 48: 357-63. Căutare în Google Scholar

21. Yan D, Chen D, Chen D, Shen J, Xiao G, van Wijnen AJ, Im HJ. Lactoferricina bovină este antiinflamatoare și anticatabolică în cartilajul articular uman și în sinovială. J Cell Physiol 2013; 228: 447-56. Căutare în Google Scholar

22. van den Berg WB. Osteoartrita anului 2010 în revistă: patomecanisme. Osteoartritis Cartilage 2011; 19: 338-41. Căutare în Google Scholar

23. Li NG, Shi ZH, Tang YP, Wang ZJ, Song SL, Qian LH, Qian DW, Duan JA. O nouă speranță pentru tratamentul osteoartritei prin inhibarea selectivă a MMP-13. Curr Med Chem 2011; 18: 977-1001. Căutare în Google Scholar

24. De Rienzo F, Saxena P, Filomia F, Caselli G, Colace F, Stasi L, Giordani A, Menziani MC. Progress towards the identification of new aggrecanase inhibitors. Curr Med Chem 2009; 16: 2395-415. Căutare în Google Scholar

25. Mader JS, Smyth D, Marshall J, Hoskin DW. Lactoferricina bovină inhibă angiogeneza indusă de factorul de creștere a fibroblastului de bază și de factorul de creștere endotelială vasculară165 prin competiția pentru locurile de legare asemănătoare heparinei pe celulele endoteliale. Am J Pathol 2006; 169: 1753-66. Căutare în Google Scholar

26. Su SL, Tsai CD, Lee CH, Salter DM, Lee HS. Expresia și reglarea receptorului Toll-like 2 de către IL-1beta și fragmente de fibronectină în condrocitele articulare umane. Osteoarthritis Cartilage 2005; 13: 879-86. Căutare în Google Scholar

27. Kim HA, Cho ML, Choi HY, Yoon CS, Jhun JY, Oh HJ, Kim HY. Calea catabolică mediată de receptorii toll-like în condrocitele osteoartritice umane. Arthritis Rheum 2006; 54: 2152-63. Căutare în Google Scholar

28. Yan D, Chen D, Chen D, Hawse JR, van Wijnen AJ, Im HJ. Lactoferricina bovină induce TIMP-3 prin intermediul axei ERK1/2-Sp1 în condrocitele articulare umane. Gene 2013; 517: 12-8. Căutare în Google Scholar

29. Apte SS, Olsen BR, Murphy G. Structura genetică a inhibitorului tisular al metaloproteinazelor (TIMP)-3 și activitățile sale inhibitoare definesc familia distinctă de gene TIMP. J Biol Chem 1995; 270; 14313-8. Căutare în Google Scholar

30. Knauper V, Will H, López-Otin C, Smith B, Atkinson SJ, Stanton H, Hembry RM, Murphy G. Mecanisme celulare de activare a procolagenazei-3 (MMP-13) umane. Dovezi că MT1-MMP (MMP-14) și gelatinaza a (MMP-2) sunt capabile să genereze enzima activă. J Biol Chem 1996; 271: 17124-31. Căutare în Google Scholar

31. Kashiwagi M, Tortorella M, Nagase H, Brew K. TIMP-3 este un inhibitor puternic al aggrecanazei 1 (ADAM-TS4) și al aggrecanazei 2 (ADAM-TS5). J Biol Chem 2001; 276: 12501-4. Căutare în Google Scholar

32. Wick M, Härönen R, Mumberg D, Bürger C, Olsen BR, Budarf ML, Apte SS, Müller R. Structure of the human TIMP-3 gene and its cell cycle-regulated promoter. Biochem J 1995; 311: 549-54. Căutare în Google Scholar

33. Qureshi HY, Sylvester J, El Mabrouk M, Zafarullah M. Expresia indusă de TGF-beta a genei inhibitorului tisular al metaloproteinazelor-3 în condrocite este mediată de calea kinazei reglate de semnalul extracelular și de factorul de transcripție Sp1. J Cell Physiol 2005; 203: 345-52. Căutare în Google Scholar

34. Kim JS, Ellman MB, An HS, Yan D, van Wijnen AJ, Murphy G, Hoskin DW, Im HJ. Lactoferricina mediază efectele anabolice și anti-catabolice în discul intervertebral. J Cell Physiol 2012; 227: 1512-20. Căutare în Google Scholar

35. Sekiya I, Tsuji K, Koopman P, Watanabe H, Yamada Y, Shinomiya K, Nifuji A, Noda M. SOX-9 sporește activitatea promotorului/întăritorului genei aggrecan și este reglată de acidul retinoic într-o linie celulară derivată din cartilaj, TC6. J Biol Chem 2000; 275: 10738-44. Căutare în Google Scholar

36. Zhang Y, An HS, Thonar EJ, Chubinskaya S, He TC, Phillips FM. Efectele comparative ale proteinelor morfogenetice osoase și ale supraexprimării SOX-9 asupra metabolismului matricei extracelulare a celulelor nucleului pulpos de bovine. Spine (Phila Pa 1976) 2006; 31: 2173-9. Căutare în Google Scholar

37. Ellman MB, Kim J, An HS, Chen D, Kc R, Li X, Xiao G, Yan D, Suh J, van Wjnen AJ, Wang JH, Kim SG, Im HJ. Lactoferricina îmbunătățește căile anabolice stimulate de BMP7 în celulele discului intervertebral. Gene 2013; 524: 282-91. Căutare în Google Scholar

38. Flechtenmacher J, Huch K, Thonar EJ, Mollenhauer JA, Davies SR, Schmid TM, Puhl W, Sampath TK, Aydelotte MB, Kuettner KE. Proteina osteogenică umană recombinantă 1 este un stimulator puternic al sintezei proteoglicanilor cartilajului și a colagenilor de către condrocitele articulare umane. Arthritis Rheum 1996; 39: 1896-904. Căutare în Google Scholar

39. Sampath TK, Maliakal JC, Hauschka PV, Jones WK, Sasak H, Tucker RF, White KH, Coughlin JE, Tucker MM, Pang RH. Proteina osteogenică umană recombinantă-1 (hOP-1) induce formarea de os nou in vivo cu o activitate specifică comparabilă cu proteina osteogenică bovină naturală și stimulează proliferarea și diferențierea osteoblastelor in vitro. J Biol Chem 1992; 267: 20352-62. Căutare în Google Scholar

40. Kim JS, Ellman MB, Yan D, An HS, Kc R, Li X, Chen D, Xiao G, Cs-Zabo G, Hoskin DW, Buechter DD, van Wijnen AJ, Im HJ. Lactoferricina mediază efectele antiinflamatorii și anti-catabolice prin inhibarea activității IL-1 și LPS în discul intervertebral. J Cell Physiol 2013; 228: 1884-96. Căutare în Google Scholar

41. Millward-Sadler SJ, Costello PW, Freemont AJ, Hoyland JA. Reglarea expresiei genei catabolice în celulele discului intervertebral uman normal și degenerat: implicații pentru patogeneza degenerării discului intervertebral. Arthritis Res Ther 2009; 11: R65. Căutare în Google Scholar

42. Liu MH, Sun JS, Sun JS, Tsai SW, Sheu SY, Chen MH. Icariina protejează condrocitele murine de răspunsurile inflamatorii induse de lipopolizaharide și de degradarea matricei extracelulare. Nutr Res 2010; 30: 57-65. Căutare în Google Scholar

43. Campo GM, Avenoso A, Avenoso A, Nastasi G, Micali A, Prestipino V, Vaccaro M, D’Ascola A, Calatroni A, Campo S. Hyaluronan reduce inflamația în artrita experimentală prin modularea expresiei cartilajului TLR-2 și TLR-4. Biochim Biophys Acta 2011; 1812: 1170-81. Căutați în Google Scholar

.