Abstract
În 1992 am raportat o nouă metodă de secvențiere a proteinelor de la extremitatea carboxi-terminală (C-terminal) (Boyd et al., 1992). În ultimii 2 ani, am continuat investigațiile noastre, inclusiv mecanismul de activare inițială a grupului carboxil C-terminal și modificările deliberate ale catenelor laterale reactive ale aminoacizilor cu reactivii de secvențiere. Prin selectarea reactivilor și a condițiilor de reacție utilizate pentru protocolul nostru de secvențiere, acidul aspartic, acidul glutamic, serina și treonina sunt derivatizate. Amidarea acidului aspartic și a acidului glutamic, precum și acetilarea serinei și a treoninei, au condus la îmbunătățirea randamentelor în secvențierea acestor reziduuri. Acidul aspartic și acidul glutamic sunt acum clasificate, așa cum se vede în tabelul 1, ca reziduuri de aminoacizi care sunt ușor de secvențiat. Criteriul nostru pentru a determina dacă un reziduu este numit în mod fiabil este capacitatea de a secvenția și de a detecta acel reziduu atunci când acesta este prezent într-un nanomol dintr-o probă de proteină. În medie, este posibil să se secvențieze 5 cicluri pe un nanomol de proteină aplicată pe o membrană de difluorură de poliviniliden (PVDF) dacă secvența de aminoacizi conține acele reziduuri enumerate în coloana „apelat în mod fiabil” din tabelul 1. Obiectivul nostru pentru conferința MPSA din 1994 este de a ilustra utilitatea actuală a acestei metode de secvențiere C-terminală în secvențierea proteinelor imobilizate pe PVDF.
.