Sistemul complementului este un sistem de proteine serice care reacționează cu complexele antigen-anticorp. Dacă această reacție are loc pe suprafața unei celule, va duce la formarea de pori trans-membranari și, prin urmare, la distrugerea celulei. Etapele de bază ale unui test de fixare a complementului sunt următoarele:
- Serul este separat de la pacient.
- Pacienții au în mod natural niveluri diferite de proteine ale complementului în serul lor. Pentru a anula orice efecte pe care acest lucru le-ar putea avea asupra testului, proteinele complementului din serul pacientului trebuie distruse și înlocuite cu o cantitate cunoscută de proteine standardizate ale complementului.
- Serul este încălzit în așa fel încât toate proteinele complementului – dar niciunul dintre anticorpi – din el să fie distruse. (Acest lucru este posibil deoarece proteinele complementului sunt mult mai sensibile la distrugerea prin căldură decât anticorpii.)
- Se adaugă în ser o cantitate cunoscută de proteine standardizate ale complementului. (Aceste proteine se obțin frecvent din serul de cobai.)
- Antigenul de interes se adaugă la ser.
- Se adaugă la ser globule roșii de oaie (sRBC) care au fost legate în prealabil de anticorpi anti-sRBC. Testul este considerat negativ dacă soluția devine roz în acest punct și pozitiv în caz contrar.
Dacă serul pacientului conține anticorpi împotriva antigenului de interes, aceștia se vor lega de antigen în etapa 3 pentru a forma complexe antigen-anticorp. Proteinele complementului vor reacționa cu acești complecși și vor fi epuizate. Astfel, atunci când complexele sRBC-anticorp sunt adăugate în etapa 4, nu va mai exista complement în ser. Cu toate acestea, dacă nu sunt prezenți anticorpi împotriva antigenului de interes, complementul nu va fi epuizat și va reacționa cu complexele sRBC-anticorp adăugate în etapa 4, lizând sRBC și vărsând conținutul acestora în soluție, transformând astfel soluția în roz.
.