Ved Atlas Antibodies har vi altid arbejdet intensivt med validering af antistoffer og med at producere højt karakteriserede antistoffer, som vores kunder kan stole på.
Alle vores antistoffer er nøje evalueret med hensyn til specificitet og ydeevne og er karakteriseret i flere applikationer. Det andet valideringslag, Enhanced Validation, udføres i overensstemmelse med anbefalingerne fra International Working Group for Antibody Validation (IWGAV ), der er offentliggjort i Nature Methods. Læs videre for at få mere at vide om begreberne i Enhanced Validation og om, hvordan metoderne anvendes til at sikre vores antistoffers specificitet.
Karakterisering og validering af antistoffer
Antigendesign
For vores antistoffer starter specificiteten med designet. Antistofferne er udviklet mod rekombinante humane Protein Epitope Signature Tags (PrESTs) af ca. 50 til 150 aminosyrer. PrEST-sekvenserne er designet til at have den lavest mulige identitet med andre humane proteiner.
Protein Array
Specificiteten og renheden er valideret ved hjælp af protein array mod 364 humane rekombinante proteinfragmenter.
Funktionel validering og karakterisering
Alle Triple A polyklonaler og PrecisA monoklonaler, der tilbydes af Atlas Antibodies, er valideret og karakteriseret i hver enkelt anvendelse, som det specifikke antistof er godkendt til (IHC, ICC-IF, WB), i de fleste normale og kræftramte menneskelige væv samt på subcellulært niveau. Hvert antistof er ledsaget af et stort antal billeder på Human Protein Atlas, der viser resultatet af disse valideringsassays, som hver især er manuelt kommenteret af forskere. I IHC-undersøgelsen vurderes hvert antistof i 44 normale væv og de 20 mest almindelige kræftformer.
- Læs mere om karakterisering og validering i IHC, WB og ICC-IF.
Antistofgodkendelse
Antistofspecificiteten vurderes yderligere, og den endelige godkendelse tager hensyn til litteratur, bioinformatik og RNA-sekventeringsdata.
Transparens
Vi mener, at gennemsigtighed og åben adgang er afgørende for forskningen. Alle karakteriseringsdata, herunder billeder, præsenteres på hjemmesiderne Atlas Antibodies og Human Protein Atlas. I modsætning til de fleste leverandører af antistoffer giver vi dig den nøjagtige immunogensekvens, der er anvendt til at frembringe antistoffet.
Forbedret validering
I tillæg til den omfattende validering og karakterisering, der altid udføres for vores antistoffer, udfører vi applikationsspecifikke forstærket validering. Den udvidede validering følger de retningslinjer, der er foreslået af International Working Group for Antibody Validation (IWGAV) i Nature Methods.
Arbejdsgruppen blev dannet af fremtrædende forskere fra hele verden for at “formulere de bedste metoder til validering af antistoffer, der anvendes i almindelige forskningsanvendelser, og for at tilvejebringe retningslinjer, der sikrer antistoffernes reproducerbarhed. “1 IWGAV foreslog fem konceptuelle søjler for antistofvalidering, der skal anvendes på en applikationsspecifik måde. Mindst en af søjlerne skal anvendes, for at et antistof kan valideres i en specifik anvendelse. Hos Atlas Antibodies baserer vi Enhanced Validation på Human Protein Atlas’ fortolkning af disse søjler, som forklares her.
Lær om Enhanced Validation
Enhanced Validation giver øget sikkerhed for antistofspecificitet i en defineret kontekst. Dette sikres ved at anvende den mest relevante valideringsmetode for hver kombination af protein, prøve og anvendelse.
Lær mere
Reproducerbarhed
Ud over at udføre en grundig validering er det af afgørende betydning at sikre antistofreproducerbarheden. Hvert nyt parti af et antistof skal præstere lige godt sammenlignet med et tidligere parti, således at eksperimenterne med antistoffet kan gentages med de samme resultater. Hos Atlas Antibodies tester vi alle nye antistofpartier parallelt med eksisterende partier i et stort sæt af prøver.
- Læs mere om, hvordan vi sikrer antistoffers reproducerbarhed
1 Gruppen af fremtrædende forskere fra Stanford University, Yale University, MIT, UCSD og NIH i USA, University of Toronto i Canada, EMBL i Tyskland, Niigata University i Japan og Science for Life Laboratory i Sverige, blev dannet for at udvikle formelle retningslinjer for validering og reproducerbarhed af antistoffer, som skal bruges af antistofproducenter til at validere antistoffer på en standardiseret måde (Nature Methods, september 2016).