Az Atlas Antitesteknél mindig is sokat foglalkoztunk antitestek validálásával és olyan magasan jellemzett antitestek előállításával, amelyekben ügyfeleink megbízhatnak.
Minden antitestünket szigorúan értékeljük a specificitás és a teljesítmény szempontjából, és számos alkalmazásban jellemezzük. A validálás második rétegét, az Enhanced Validation-t a Nature Methods-ban közzétett International Working Group for Antibody Validation (IWGAV ) ajánlásait követve végezzük. Olvasson tovább, hogy megismerje az Enhanced Validation fogalmait és azt, hogy hogyan alkalmazzák a módszereket antitestjeink specifitásának biztosítására.
Az antitestek jellemzése és validálása
Antigéntervezés
Az antitestek esetében a specifitás a tervezéssel kezdődik. Az antitesteket körülbelül 50-150 aminosavból álló rekombináns humán Protein Epitope Signature Tags (PrEST) ellen fejlesztjük ki. A PrEST szekvenciákat úgy tervezzük, hogy a lehető legkisebb azonosságot mutassák más emberi fehérjékkel.
Protein Array
A specifitást és a tisztaságot 364 humán rekombináns fehérjefragmentummal szemben fehérje array-vel validálták.
Funkcionális validálás és jellemzés
Az Atlas Antitestek által kínált összes Triple A poliklonális és PrecisA monoklonális antitestet validálták és jellemezték minden olyan alkalmazásban, amelyre az adott antitestet jóváhagyták (IHC, ICC-IF, WB), a normál és rákos emberi szövetek többségében, valamint szubcelluláris szinten. Minden egyes antitesthez nagyszámú kép tartozik a Human Protein Atlason, amelyek e validálási vizsgálatok eredményét mutatják, és amelyeket a kutatók kézzel jegyzeteltek. IHC-ben minden egyes antitestet 44 normál szövetben és a 20 leggyakoribb rákos megbetegedésben értékelnek.
- Tudjon meg többet az IHC, WB és ICC-IF jellemzésről és validálásról.
Az antitestek jóváhagyása
Az antitestek specificitását tovább értékeljük, és a végső jóváhagyásnál figyelembe vesszük az irodalmi, bioinformatikai és RNS-szekvenálási adatokat.
Átláthatóság
Hiszünk abban, hogy az átláthatóság és a nyílt hozzáférés kulcsfontosságú a kutatásban. Minden jellemzési adat, beleértve a képeket is, megtalálható az Atlas Antibodies és a Human Protein Atlas honlapokon. A legtöbb antitest beszállítóval ellentétben mi megadjuk az antitest előállításához használt pontos immunogén szekvenciát.
Elnagyított validáció
Az antitestek esetében mindig elvégzett széles körű validáción és jellemzésen túlmenően alkalmazásspecifikus fokozott validációt is végzünk. A fokozott validálás a Nature Methods-ban megjelent International Working Group for Antibody Validation (IWGAV) által javasolt irányelveket követi.
A munkacsoportot a világ minden tájáról származó neves kutatók hozták létre, hogy “megfogalmazzák a leggyakoribb kutatási alkalmazásokban használt antitestek validálásának legjobb megközelítéseit, és olyan irányelveket adjanak, amelyek biztosítják az antitestek reprodukálhatóságát. “1 Az IWGAV öt koncepcionális pillért javasolt az antitestek validálására, amelyeket alkalmazásspecifikusan kell alkalmazni. A pillérek közül legalább az egyiket alkalmazni kell ahhoz, hogy egy antitestet egy adott alkalmazásban validálni lehessen. Az Atlas Antitesteknél a továbbfejlesztett validációt a Human Protein Atlas e pillérek itt kifejtett értelmezésére alapozzuk.
Tudjon meg többet a továbbfejlesztett validációról
A továbbfejlesztett validáció az antitestspecifikusság fokozott biztonságát nyújtja egy meghatározott kontextusban. Ezt a fehérje, a minta és az alkalmazás minden egyes kombinációjára a legmegfelelőbb validálási módszer alkalmazása biztosítja.
Tudjon meg többet
Megismételhetőség
Az alapos validálás elvégzése mellett létfontosságú az antitestek reprodukálhatóságának biztosítása. Az antitest minden egyes új tételének egyformán kell teljesítenie az előző tételhez képest, hogy az antitestet használó kísérletek azonos eredményekkel megismételhetők legyenek. Az Atlas Antitesteknél minden új antitesttételt a meglévő tételekkel párhuzamosan tesztelünk nagyszámú mintán.
- Tudja meg, hogyan biztosítjuk az antitestek reprodukálhatóságát
1 Az USA-ban a Stanford Egyetem, a Yale Egyetem, az MIT, az UCSD és az NIH, Kanadában a Torontói Egyetem kiváló kutatóiból álló csoport, a németországi EMBL, a japán Niigata Egyetem és a svédországi Science for Life Laboratory, azzal a céllal alakult, hogy az antitestek validálására és reprodukálhatóságára vonatkozó hivatalos iránymutatásokat dolgozzon ki, amelyeket az antitestgyártók az antitestek szabványosított módon történő validálásához használhatnak (Nature Methods, 2016. szeptember).