No Atlas Antibodies, sempre trabalhamos extensivamente com validação de anticorpos e com a produção de anticorpos altamente caracterizados em que os nossos clientes podem confiar.
Todos os nossos anticorpos são rigorosamente avaliados quanto à especificidade e desempenho e são caracterizados em diversas aplicações. A segunda camada de validação, Enhanced Validation, é realizada seguindo as recomendações do International Working Group for Antibody Validation (IWGAV ) publicadas em Nature Methods. Continue lendo para aprender sobre os conceitos de Validação Avançada e como os métodos são empregados para garantir a especificidade dos nossos anticorpos.
Caracterização e Validação de Anticorpos
Desenho de Antigénio
Para os nossos anticorpos, a especificidade começa com o desenho. Os anticorpos são desenvolvidos contra a proteína humana recombinante Epitope Signature Tags (PrESTs) de aproximadamente 50 a 150 aminoácidos. As sequências PrEST são desenhadas para ter a menor identidade possível para outras proteínas humanas.
Protein Array
A especificidade e pureza são validadas por array de proteínas contra 364 fragmentos de proteínas recombinantes humanas.
Validação e caracterização funcional
Todos os Policlonais Triplo A e Monoclonais PrecisA oferecidos pela Atlas Antibodies são validados e caracterizados em cada aplicação o anticorpo específico é aprovado para (IHC, ICC-IF, WB), na maioria dos tecidos humanos normais e cancerígenos, bem como a nível subcelular. Cada anticorpo é acompanhado de um grande número de imagens no Atlas de Proteínas Humanas mostrando o resultado destes ensaios de validação, cada um anotado manualmente pelos investigadores. No IHC, cada anticorpo é avaliado em 44 tecidos normais e nos 20 cancros mais comuns.
- Saiba mais sobre caracterização e validação em IHC, WB e ICC-IF.
Aprovação de anticorpos
A especificidade de anticorpos é avaliada e a aprovação final leva em consideração a literatura, bioinformática e dados de sequenciamento do RNA.
Transparência
Consideramos que a transparência e o acesso aberto são cruciais para a pesquisa. Todos os dados de caracterização, incluindo imagens, são apresentados nos sites do Atlas de Anticorpos e do Atlas de Proteínas Humanas. Ao contrário da maioria dos fornecedores de anticorpos, nós fornecemos a seqüência imunogênica exata usada para levantar o anticorpo.
Validação Avançada
Além da extensa validação e caracterização sempre realizada para os nossos anticorpos, realizamos a Validação Avançada específica da aplicação. A validação aprimorada segue as diretrizes propostas pelo Grupo de Trabalho Internacional para Validação de Anticorpos (IWGAV) em Métodos da Natureza.
O grupo de trabalho foi formado por distintos pesquisadores de todo o mundo para “formular as melhores abordagens para validação de anticorpos usados em aplicações comuns de pesquisa e fornecer diretrizes que garantam a reprodutibilidade de anticorpos”.1 IWGAV propôs cinco pilares conceituais para validação de anticorpos, a serem usados de forma específica para aplicações. Pelo menos um dos pilares deve ser utilizado para que um anticorpo seja validado em uma aplicação específica. No Atlas de Anticorpos, baseamos a interpretação desses pilares para a Validação Avançada no Atlas de Proteínas Humanas, explicada aqui.
Aprenda sobre Validação Avançada
A validação Avançada oferece maior segurança de especificidade de anticorpos em um contexto definido. Isto é assegurado pela utilização do método de validação mais relevante para cada combinação de proteína, amostra e aplicação.
Aprenda mais
Reprodutibilidade
Além de realizar uma validação completa, é de vital importância garantir a reprodutibilidade dos anticorpos. Cada novo lote de um anticorpo tem que ter um desempenho igual ao de um lote anterior para que os experimentos usando o anticorpo possam ser repetidos com os mesmos resultados. Na Atlas Antibodies testamos todos os novos lotes de anticorpos em paralelo com os lotes existentes em um grande conjunto de amostras.
- Saiba como garantimos a reprodutibilidade dos anticorpos
1 O grupo de distintos pesquisadores da Stanford University, Yale University, MIT, UCSD, e NIH nos EUA, Universidade de Toronto no Canadá, o EMBL na Alemanha, a Universidade de Niigata no Japão e o Laboratório de Ciência para a Vida na Suécia, foi formado para desenvolver diretrizes formais para validação e reprodutibilidade de anticorpos a serem usados pelos fabricantes de anticorpos para validar anticorpos de forma padronizada (Nature Methods, setembro de 2016).