En Atlas Antibodies, siempre hemos trabajado extensamente con la validación de anticuerpos y con la producción de anticuerpos altamente caracterizados en los que nuestros clientes pueden confiar.
Todos nuestros anticuerpos son evaluados rigurosamente en cuanto a especificidad y rendimiento y son caracterizados en varias aplicaciones. La segunda capa de validación, la Validación Mejorada, se realiza siguiendo las recomendaciones del Grupo Internacional de Trabajo para la Validación de Anticuerpos (IWGAV ) publicadas en Nature Methods. Continúe leyendo para conocer los conceptos de la Validación Mejorada y cómo se emplean los métodos para garantizar la especificidad de nuestros anticuerpos.
Caracterización y validación de anticuerpos
Diseño de antígenos
Para nuestros anticuerpos, la especificidad comienza con el diseño. Los anticuerpos se desarrollan contra etiquetas epitópicas recombinantes de proteínas humanas (PrEST) de aproximadamente 50 a 150 aminoácidos. Las secuencias PrEST están diseñadas para tener la menor identidad posible con otras proteínas humanas.
Matriz de proteínas
La especificidad y la pureza se validan mediante una matriz de proteínas frente a 364 fragmentos de proteínas recombinantes humanas.
Validación y caracterización funcional
Todos los policlonales Triple A y monoclonales PrecisA ofrecidos por Atlas Antibodies están validados y caracterizados en cada aplicación para la que el anticuerpo específico está aprobado (IHC, ICC-IF, WB), en la mayoría de los tejidos humanos normales y cancerosos, así como a nivel subcelular. Cada anticuerpo va acompañado de un gran número de imágenes en el Atlas de Proteínas Humanas que muestran el resultado de estos ensayos de validación, cada uno anotado manualmente por los investigadores. En IHC, cada anticuerpo se evalúa en 44 tejidos normales y en los 20 cánceres más comunes.
- Aprenda más sobre la caracterización y la validación en IHC, WB e ICC-IF.
Aprobación de anticuerpos
La especificidad de los anticuerpos se evalúa además y la aprobación final tiene en cuenta la literatura, la bioinformática y los datos de secuenciación de ARN.
Transparencia
Creemos que la transparencia y el acceso abierto son cruciales para la investigación. Todos los datos de caracterización, incluidas las imágenes, se presentan en los sitios web de Atlas Antibodies y Human Protein Atlas. A diferencia de la mayoría de los proveedores de anticuerpos, le proporcionamos la secuencia exacta del inmunógeno utilizado para criar el anticuerpo.
Validación mejorada
Además de la extensa validación y caracterización que siempre se realiza para nuestros anticuerpos, llevamos a cabo una validación mejorada específica para cada aplicación. La validación mejorada sigue las directrices propuestas por el Grupo de Trabajo Internacional para la Validación de Anticuerpos (IWGAV) en Nature Methods.
El grupo de trabajo fue formado por distinguidos investigadores de todo el mundo para «formular los mejores enfoques para la validación de anticuerpos utilizados en aplicaciones de investigación comunes y para proporcionar directrices que garanticen la reproducibilidad de los anticuerpos».1 El IWGAV propuso cinco pilares conceptuales para la validación de anticuerpos, que deben utilizarse de manera específica para cada aplicación. Al menos uno de los pilares debe utilizarse para que un anticuerpo sea validado en una aplicación específica. En Atlas Antibodies, basamos la validación mejorada en la interpretación de estos pilares por parte de Human Protein Atlas, que se explica aquí.
Aprenda sobre la validación mejorada
La validación mejorada ofrece una mayor seguridad de la especificidad del anticuerpo en un contexto definido. Esto se garantiza utilizando el método de validación más relevante para cada combinación de proteína, muestra y aplicación.
Aprenda más
Reproducibilidad
Además de realizar una validación exhaustiva, es de vital importancia garantizar la reproducibilidad del anticuerpo. Cada nuevo lote de un anticuerpo tiene que tener el mismo rendimiento en comparación con un lote anterior para que los experimentos con el anticuerpo puedan repetirse con los mismos resultados. En Atlas Antibodies probamos todos los nuevos lotes de anticuerpos en paralelo a los lotes existentes en un gran conjunto de muestras.
- Descubra cómo garantizamos la reproducibilidad de los anticuerpos
1 El grupo de distinguidos investigadores de la Universidad de Stanford, la Universidad de Yale, el MIT, la UCSD y el NIH en EE.UU., la Universidad de Toronto en Canadá, el EMBL en Alemania, la Universidad de Niigata en Japón y el Science for Life Laboratory en Suecia, se formó para desarrollar directrices formales para la validación de anticuerpos y la reproducibilidad que deben utilizar los fabricantes de anticuerpos para validar los anticuerpos de manera estandarizada (Nature Methods, septiembre de 2016).